Как выглядят тромбоциты в камере горяева. Тромбоциты по фонио. Реактивы и оборудование

Их количество в крови может свидетельствовать о состоянии здоровья, а отклонения от нормы – первая причина развития патологических процессов сердечно-сосудистой системы. Данные клетки синтезируются из плазмы мегакариоцитов – крупных клеток костного мозга. Продолжительность жизни не велика – всего 5-7 дней, после чего они утилизируются селезенкой и частично печенью. Тромбоцитам свойственно старение, от которого зависит качественный состав крови. Чтобы определить уровень содержания тромбоцитов в крови, используют лабораторный анализ Фонио, при котором исчисление производится наиболее точно. Особенности этого метода и способы вычислений разберем далее.

Исследование по Фонио

Такой способ лабораторного исследования предполагает забор крови из пальца, после чего ее смешивают с реактивами и рассматривают мазок под микроскопом. Определение числа тромбоцитов исчисляется по формуле, в эквиваленте отношения к эритроцитам, как наиболее тяжелым и объемным кровяным клеткам. То есть, каждый мазок рассматривают в перерасчете на 1000 эритроцитов. Такое соотношение позволяет более точно выявить наличие патологий синтеза тромбоцитарных клеток, а также снижает риски выявления псевдобтромбоцитоза.

Если рассматривать это соотношение более подробно, то вначале исчисляется общее количество эритроцитов в мазке, после чего показатель умножается на мл или мкл крови. Полученную величину сопоставляют с количественным составом тромбоцитов.

Суть метода основывается на взаимозависимости фракций крови. Иными словами, при повышенном содержании тромбоцитов, эритроцитов также будет больше. Прямая пропорциональность позволяет определять не только тромбоцитарный уровень в мазке крови, но и пересчитывать его на литры и микролитры.

Это удобно, поскольку нет необходимости брать много крови и обследовать ее всю, на что уйдет масса времени, сил лаборанта, а также реактивов, от чего стоимость анализа будет значительно выше, нежели имеется сейчас.

Последовательность проведения анализа

Для анализа тромбоцитарного уровня по Фонио обычно имеются показания, поэтому пациента заблаговременно подготавливают к забору крови. Предлагается отказаться от лекарственных препаратов, алкоголя, жирной и сладкой пищи, а также газированных напитков за 24 часа до проведения исследования.

Для анализа потребуются следующие реактивы:

• раствор сульфата магния – выступает в качестве коагулянта;
• краситель Романовского-Гимзы – возволяет разглядеть тромбоциты в общей массе крови, цвет которых измениться под воздействием красителя.

Кровь на анализ берут из безымянного пальца, который хорошо дезинфицируют спиртом или муравьиной кислотой.

После этого производится прокол скарификатором пучки. Первую появившуюся кровь снимают сухой ватой, поскольку она не пригодна для анализа. В появившуюся на поверхности пальца вторую каплю, вводят специальный раствор сульфата магния, после чего производят забор образованной субстанции специальным стеклянным периходником в пробирку. Палец пациента обрабатывается спиртом, дабы избежать инфицирования.

Из полученных образцов готовят мазки, нанося небольшое количество крови на предметное стекло, а также внося краситель, который поможет при подсчете фракций. Продолжительность окраски составляет от 35 минут до 2 часов, в зависимости от качества реактивов.

Ход определения

Зрительно определить тромбоциты несложно. В зависимости от возраста, клетки могут окраситься в фиолетовый или розовый оттенок. Их границы четки, а в центре отмечается наличие специфических гранул. Форма округлая вытянутая, иногда с наличием ровных овалов.

На определенном фиксированном участке считают количество эритроцитов, а также, сколько на них приходиться тромбоцитов. Такая процедура производится до тех пор, пока не будет подсчитано ровно 1000 эритроцитов. Во внимание берут только близлежащие клетки, которые образуют группы. Единичные включения не несут никакой ценности и не составят биологической нагрузки при исследовании.

Предметное стекло перемещают под микроскопом до тех пор, пока не получиться нужная отметка. Для этого меняются поля зрения, что доступно современной технике. В некоторых клиниках данный подсчет производиться автоматически. Специальные микроскопы способны самостоятельно распознавать различные фракции крови, а также определять их соотношение в общей массе.

Получив необходимые показатели, уровень тромбоцитов рассчитывают по формуле:

• х – искомый уровень тромбоцитов;
• а – количество тромбоцитов в мазке на 1000 эритроцитов;
• b – количество эритроцитов в 1 л крови;
• 1000 – показатель содержания эритроцитов в мазке.

Расчет количества тромбоцитов

Чтобы было понятнее, как производиться расчет, разберем на примере. В ходе лабораторного исчисления было установлено, что количество тромбоцитов (указывается в промилле, поскольку величина относительная количеству эритроцитов) 75. На 1 мкл количество эритроцитов составляет 5х10, из чего следует, что количество тромбоцитов: 753,5х10/1000. В итоге получается, что в 1 мкл крови содержится 262х10, что считается нормой.

Особенности и преимущества метода исследования

Лабораторное определение и подсчет тромбоцитов по Фонио имеет несколько преимуществ:

1. Точность анализа – достигается за счет использования формулы расчета, компоненты которых легко можно подсчитать в капле крови.
2. Быстрота проведения – от момента забора крови до получения результата может понадобиться не более 2 часов, а с использованием высокоточного оборудования процедура займет всегоминут.
3. Не требуется дорогостоящих реактивов – достаточно ввести коагулянт, чтобы спровоцировать активность тромбоцитов, а также подкрасить мазок крови специальным раствором, который улучшит процесс распознания безъядерных клеток.

Главная особенность исследования заключается в получении наиболее точных результатов, нежели при развернутом анализе крови (коагулограмма).

Что влияет на качество анализа?

Выделяют 3 основополагающих фактора, которые могут значительным образом повлиять на качество и результат анализа определения количества тромбоцитов по Фонио:

1. Подготовка пациента к анализу – забор крови не производят в состоянии алкогольного опьянения (уровень тромбоцитов наряду с лейкоцитами увеличении в 3-4 раза), а также при сильной физической усталости и наличии продолжительного стресса со всеми вытекающими. Эти состояния могут провоцировать чрезмерную выработку тромбоцитов, которая является исключительно периодической и не несет в себе информацию о реальном положении вещей. Перед забором крови лучше ничего не есть, а также отказаться от приема любых лекарств. Оптимальное время для взятия образца – 7-9 часов утра.
2. Качество реактивов – при использовании некачественных реактивов могут присутствовать отклонения от нормы. В подобном случае пациенту предлагают сдавать анализ на Фонио трижды, с периодичностью 2-3 дня. Это позволит наиболее полно и точно оценить состояние здоровья, а также минимизировать погрешность.
3. Особые состояния организма – при менструации у женщин, беременности, в лактационный период результативность методики стремительно снижается. Дело в том, что гормоны, которые управляют женским организмом, постоянно подстраиваются под биологические процессы, контролируя их функциональность. У мужчин такие состояния могут наблюдать при сильной физической нагрузке, особенно это касается спортсменов и тяжеловесов.

Выявить истинные проблемы со здоровьем поможет только комплексное обследование всего организма, предпосылкой проведения которого является неудовлетворительный результат анализа крови по Фонио.

Таким образом, данный метод исследования уровня тромбоцитов не только удобен и прост в проведении, но и позволяет получать точные результаты.

Исчисления одной капли крови можно сопоставить с литром или микролитром, поэтому сразу будут видны отклонения от нормы, если они есть. Стоимость процедуры невелика, а продолжительность ожидания результатов не превышает 3 часов. Это позволяет быстро получить нужные данные в критических состояниях пациента, когда каждая секунда может стать последней. Простота формулы позволяет самостоятельно исчислять уровень тромбоцитов, но на сегодняшний день большинство клиник пользуются специальными электронными микроскопами, способными производить все подсчеты и самостоятельно выдавать конечный результат.

Добавить комментарий Отменить ответ

При использовании данного сайта, вы подтверждаете свое согласие на использование файлов cookie в соответствии с настоящим уведомлением в отношении данного типа файлов. Если вы не согласны с тем, чтобы мы использовали данный тип файлов, то вы должны соответствующим образом установить настройки вашего браузера или не использовать сайт.

Нормы тромбоцитов, анализ по методу Фонио, способы нормализации

Общий анализ крови включает исследование количественного состава клеток крови: эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.

В лабораториях используют автоматические гематологические счетчики, но методы микроскопического анализа остаются наиболее информативными и точными. Один из таких методов – микроскопия мазка по Фонио для подсчета количества тромбоцитов.

Микроскопию мазка используют в тех случаях, когда результаты исследований автоматического подсчета гемоанализаторами значительно отклоняются от нормы. Тромбоциты по Фонио подсчитываются по формуле, привязанной к значению абсолютного количества эритроцитов в крови. Поэтому методика является частью общего исследования крови и выполняется после автоматического подсчета количества других клеток крови (эритроцитов).

Тромбоциты

Тромбоциты – безъядерные клетки, образуемые из мегакариоцитов костного мозга. После созревания и попадания в кровь клетка живет 5-7 суток. Старые клетки утилизируются печенью и селезенкой. Процесс старения у этих клеток особо выражен.

Тромбоциты, как и другие клетки крови, делятся на юные, зрелые и старые. В норме в крови содержится не менее 95% зрелых клеток. Выброс в кровь незрелых клеток может быть вызван фактором раздражения (множественные повреждения сосудов). В крови могут быть обнаружены и дегенеративные, старые клетки, что свидетельствует о патологии процесса созревания и утилизации.

Тромбоциты – главные участники процессов тромбообразования. Вместе с тем, выделяя особые ферменты, они стимулируют деление клеток и регенерацию тканей, регулируют уровень проницаемости мембран клеток, поддерживают эластичность стенок сосудов.

По их количеству можно определить состояние здоровья сердечно-сосудистой системы. Повышенное количество называют тромбоцитозом, пониженное – тромбоцитопенией.

Тромбоциты хорошо окрашиваются красителями. В зависимости от степени зрелости клетки окрашиваются с разной интенсивностью, что упрощает дифференциальную диагностику их морфологического состава.

Метод подсчета тромбоцитов по Фонио

Клетки подсчитывают разными способами. Камера Горяева и метод Фонио принципиально похожи и являются самыми распространенными. Суть метода Фонио заключается в параллельном подсчете окрашенных клеток эритроцитов и тромбоцитов в полях сетки микроскопа. В камере Горяева эта сетка нанесена лазером на само стекло.

Подсчет тромбоцитов по Фонио выполняют с использованием недорогих реактивов:

• В качестве коагулянта применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА);
• Для фиксации мазка используют раствор Лейшмана (раствор эозин-метиленовой синьки в метаноле).
• Эозиновый краситель Гимзы для окраски по Романовскому.

Метод подсчета тромбоцитов по методу Фонио популярен не только из-за простоты и низкой себестоимости. В отличие от подсчета тромбоцитов в камере Горяева микроскопию мазка по Фонио можно выполнить через несколько часов или дней после сдачи анализа. Лабораториям, заваленным текущими заявками, это позволяет снизить пиковые нагрузки, связанные с утренними наплывами пациентов.

Кроме того, возможность повторной микроскопии через несколько дней позволит сравнить показания или уточнить результат подсчета.

Выполнение анализа

Для анализа используется капиллярная кровь (из пучки пальца).

После прокола пучки первая капля не используется, ее удаляют ваткой. Для мазка берут вторую каплю. Обычно коагулянт добавляют в выступившую каплю крови и сразу помещают образец на стекло. Но лаборант может смешивать кровь с коагулянтом в пробирке.

Мазки фиксируются и окрашиваются методом Паппенгейма. При нанесении на приготовленный мазок крови нескольких капель раствора фиксатора клетки приклеиваются к стеклу. Гематологические фиксаторы способны прокрашивать клетки, что ускоряет процесс подготовки мазка.

Затем на мазок наносят несколько капель краски Гимзы-Романовского и выдерживают 2-3 ч. (с использованием магнезии) илимин. (с использованием в качестве коагулянта ЭТА). В результате клетки крови окрашиваются и хорошо просматриваются для ручного подсчета.

После промывания мазок высушивают в сушильном шкафу и приступают к исследованию при помощи микроскопа, оснащенного иммерсионным объективом и сегментированными окулярами.

Подсчет тромбоцитов

Сетка, нанесенная на окуляры, облегчает . Лаборант считает число клеточных элементов по секторам этой сетки.

Параллельный подсчет количества эритроцитов и тромбоцитов начинают с одного сектора, и, передвигая окуляр, переходят к следующему сектору. Подсчет заканчивают, когда число эритроцитов достигнет 1000.

Важно! Погрешность метода обусловлена тем, что при подсчете учитывают только скопления этих клеток. Отдельно расположенные одиночные клетки не учитывают.

После того как получено число тромбоцитов, привязанное к 1000 клеток эритроцитов, приступают к вычислению абсолютного количества клеток в единице объема крови. Для этого понадобится значение абсолютного количества эритроцитов крови данного пациента, полученное в автоматическом анализаторе.

Расчет выполняют по такой формуле: значение абсолютного количества эритроцитов делят на 1000 и умножают на число подсчитанных при микроскопии тромбоцитов:

где T – число подсчитанных тромбоцитов, E – абсолютное число эритроцитов.

Достоверность результатов

Низкое качество оборудования и нечеткое следование методике исследования может повлиять на достоверность результата. Причины получения искаженных данных:

• Использование некачественных химикатов;
• Неправильная подготовка растворов;
• Несоблюдение сроков окрашивания;
• Неправильный режим сушильной камеры.

В условиях массового выполнения микроскопии особое значение имеет правильная организация работы, маркировка и хранение образцов.

Получение объективных результатов зависит не только от правильного выполнения всех требований методики лаборантом, но и от самого пациента. Он должен ответственно подойти к процедуре обследования и подготовиться к сдаче анализа:

• Забор крови выполняют на голодный желудок, поэтому пациент должен отказаться от приема пищи за 8 часов до визита в лабораторию.
• Если образ жизни пациента или условия его работы связаны с постоянными физическими нагрузками, рекомендуется за 2 дня до анализа их ограничить.
• Любители алкоголя должны помнить, что прием этилового спирта провоцирует многократный подъем тромбоцитов.
• Эмоциональные стрессы тоже негативно сказываются на картине крови, поэтому несколько дней в преддверии сдачи анализов нужно провести в спокойной обстановке.

Описания некоторых лекарств (гепарин, простагландин, аденозин) содержат информацию о том, что препарат временно может влиять на состав крови. Пациент обязательно должен поставить врача в известность о любых принимаемых препаратах. Врач оценит вероятность искажения результатов анализа и примет взвешенное решение о временной отмене этого средства.

Расшифровка результатов, причины отклонений

В стандартном лабораторном бланке тромбоциты обозначаются PLT. Единица, в которой представлены результаты, – тысячи единиц на микролитр. Обычно в лабораторных бланках для сравнения указана и норма.

• Норма для мужчин – 200–400 тыс./микролитр;
• Для женщин – от 180 до 320 тыс./ микролитр.

Норма для детей:

• У новорожденных до 2 недель – от 100 до 420 тыс./ микролитр;
• У малышей до года – от 150 до 350 тыс./ микролитр;
• У детей до 5 лет –тыс./ микролитр;
• У детей до 7 лет – от 180 до 150 тыс./ микролитр.

В период менструации отмечается нормальное (физиологическое) понижение клеток (тыс./мкл). Двукратное сокращение количества тромбоцитов связано с необходимостью отторжения эпителия матки. Снижение тромбоцитов у беременных (тыс./мкл) тоже считается нормальным.

Во время менструации сдавать анализ на тромбоциты не рекомендуется.

Высокие тромбоциты

Тромбоцитоз, вызванный патологией стволовых клеток в костном мозге, называют первичным.

Физиологическое повышение тромбоцитов как реакцию организма на травму, употребление алкоголя, инфекцию или отравление называют вторичной. Механизм такой реакции связан с усиленным выбросом тромбопоэтина, который стимулирует деление и рост тромбоцитов в костном мозге.

Тромбоцитоз может возникнуть в результате таких заболеваний:

Отравление, стресс и интенсивная физическая нагрузка способны вызвать увеличение количества тромбоцитов.

Важно! При обильных кровопотерях на фоне уменьшения объема крови уровень тромбоцитов снижается только в первые часы, а через несколько часов уровень может повыситься в несколько раз.

Низкие тромбоциты

Причиной тромбоцитопении зачастую становится бесконтрольное самолечение препаратами, побочным эффектом которых и становится развитие тромбоцитопении.

Причиной тромбоцитопении могут быть такие заболевания:

• Болезни печени (гепатит, цирроз);
• Нарушение функции щитовидной железы (гипертиреоз, гипотиреоз);
• Отдельные виды лейкоза;
• Мегалобластная анемия;
• Алкоголизм.

При затяжной тромбоцитопении стенки сосудов становятся хрупкими, незначительные порезы и повреждения сосудов приводят к длительному кровотечению.

Для уточнения причины низких тромбоцитов и назначения терапии пациенту придется пройти множество дополнительных обследований (УЗИ печени, селезенки, тест на антитела, МРТ). Анализ крови на число тромбоцитов по Фонио нужно будет сдавать регулярно.

Как нормализовать показатели тромбоцитов

Когда тромбоциты понижены, врач назначает медикаментозную терапию. Но пациент может сделать процесс лечения эффективнее:

• Снизить потребление соли, алкоголя, исключить из рациона морскую капусту, красные сорта винограда;
• Включить в ежедневный рацион рыбу, печень, гречку, орехи, яблоки, сельдерей, сладкий перец.
• Не принимать лекарства, которые вызывают тромбоцитопению (антибиотики, антидепрессанты).
• Принимать синтетические витаминные комплексы, включающие витамины группы А, В, С.

При высоких показателях снизить уровень тромбоцитов можно при помощи нормализации образа жизни, уменьшения стрессов, травм. Из медикаментов снизить тромбоциты поможет ацетилсалициловая кислота. Дозы препарата назначает только врач.

Нужно внести коррективы в свой рацион:

• Исключить шиповник, гранат, бананы, манго;
• Употреблять продукты, содержащие ацетилсалициловую, яблочную или лимонную кислоту и разжижающие кровь (клюква, свекла, облепиха, томаты, зеленый чай);
• Контролировать объем употребляемой жидкости, так как обезвоживание приводит к повышению вязкости крови.

Эти меры помогают нормализовать уровень тромбоцитов, нарушения которого носят вторичный (реактивный) характер. Первичные тромбоцитопении и тромбоцитозы подлежат длительной диагностике и терапии.

Определение числа тромбоцитов в крови

Число тромбоцитов: микроскопический метод.

Определение числа тромбоцитов - важнейший метод исследования, способный обнаружить наиболее частое нарушение гемостатического потенциала крови - тромбоцитопению. В настоящее время для определения числа тромбоцитов имеется несколько лабораторных технологий (автоматизированный, по Фонио и др.). Наибольшую точность имеет микроскопический метод при подсчете в камере, однако этот метод требует от врача-лаборанта опыта, напряжения зрения, концентрации внимания.

Принцип метода

Принцип метода основан на определении числа тромбоцитов путем их подсчета в камере Горяева обычной световой микроскопией или с помощью микроскопа с фазово-контрастной приставкой после разведения крови и гемолиза эритроцитов раствором оксалата аммония.

С целью повысить точность микроскопического метода число тромбоцитов подсчитывают в двух камерах, затем вычисляют среднюю арифметическую.

Реактивы и оборудование

• 1% раствор оксалата аммония.
• Смеситель Сали.
• Камера Горяева (2 шт.).
• Световой микроскоп с увеличением х 40 или микроскоп с фазово-контрастной приставкой (например, КФ-4 или др.).

Образцы крови для исследования

Определение числа тромбоцитов возможно в крови, стабилизированной цитратом натрия или нанесенным на стенки пластиковой пробирки мелкодисперсным порошком этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА). При использовании микроскопического метода предпочтительнее брать кровь на цитрате натрия, чтобы исключить влияние ЭДТА на результаты подсчета тромбоцитов.

Техника выполнения

В сухую пластиковую пробирку вносят 1,98 мл 1% оксалата аммония и 0,02 мл крови. Медленно и аккуратно перемешивают смесь в течение 2 мин, а затем ее инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре. Далее заполняют две камеры Горяева содержимым пробирки и на 10 мин помещают их в чашку Петри, в которой находится влажная марля или смоченный фильтр. После этой инкубации, которая необходима для оседания тромбоцитов, подсчитывают их число в 25 квадратах. Среднюю арифметическую результатов подсчета в двух камерах умножают на 1000. При исследовании цитратной крови результат увеличивают на 10 % и умножают на 1000, что позволяет корректировать разведение венозной крови раствором натрия цитрата.

Оценка результатов исследования

У здорового человека число тромбоцитов в периферической крови колеблется в довольно широком диапазоне - от 150 до 400 х 109/л.

Недопустимо исследование числа тромбоцитов в охлажденных образцах крови. При гемолизе возможно занижение числа тромбоцитов. В ряде случаев при исследовании числа тромбоцитов на гематологических анализаторах встречается так называемая псевдотромбоцитопения, обусловленная агрегацией и группировкой тромбоцитов в присутствии ЭДТА. Эту проблему решает забор крови на цитрате натрия.

Для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов на гематологических анализаторах существуют контрольные образцы с разным содержанием этих клеток. О возможности использования этих образцов для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов микроскопическим методом не существует общепринятых рекомендаций. Для повышения точности результатов микроскопического исследования следует периодически контролировать воспроизводимость результатов определения числа тромбоцитов разными лаборантами в течение рабочего дня и на основе полученных данных повышать точность и снижать вариацию при выполнении этой методики Коэффициент вариации микроскопического метода у опытных лаборантов не превышает 10 %.

Интерпретация результатов исследования

В клинической картине тяжелого течения идиопатической тромбоцитопенической пурпуры доминирует геморрагический синдром. При вторичных тромбоцитопениях геморрагический синдром, как правило, умеренный, и сочетается с клиническими симптомами основного заболевания, обусловившими тромбоцитопению. В тех случаях, когда число тромбоцитов менее 100 х 109/л длительно наблюдается без каких-либо проявлений фонового заболевания, следует думать об идиопатической тромбоцитопенической пурпуре.

Тромбоцитозы также наблюдаются при миелопролиферативных заболеваниях. Нередко на фоне миелопролиферации отмечают нарушения реологических свойств крови за счет полиглобулии. В последнем случае, а также при числе тромбоцитов более 700 х 109/л у пациентов повышается риск тромбозов. Однако на фоне миелопролиферативных заболеваний, сопровождающихся тромбоцитозом более 1500 х 109/л, парадоксально наблюдается геморрагический синдром.

При тромбоцитопении и наличии геморрагического анамнеза с раннего детского возраста весьма важно оценить размер тромбоцитов, в т. ч. MPV (средний объем) в мазке крови, а также наличие каких-либо включений в тромбоциты.

Причины ошибок

• Использование одной камеры, меньшее число подсчитываемых квадратов.
• Неточность градуировки разных смесителей.
• Ошибки преаналитического этапа исследования, в т. ч. неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
• Недостаточная квалификация лаборанта.

Другие аналитические технологии

Практически все гематологические анализаторы неплохо измеряют число эритроцитов и лейкоцитов в крови, хорошие результаты точности и воспроизводимости демонстрирует метод определения концентрации гемоглобина, реализованный в таких приборах. Однако и в настоящее время еще встречаются образцы анализаторов, которые число тромбоцитов при тромбоцитопениях подсчитывают неточно, и, как правило, наблюдается завышение числа тромбоцитов при их автоматизированном подсчете. Особенно ярко этот недостаток проявляется при работе с образцами крови, в которых число тромбоцитов ниже 50 х 109/л. Этот недостаток есть следствие того, что тромбоциты гораздо мельче других клеток крови, поэтому сложнее выполнить их корректный подсчет в той же камере и такими же техническими приемами, что и другие клетки крови. Следует отметить также, что на показатели точности подсчета тромбоцитов на гематологическом анализаторе весьма существенное влияние оказывают качество и надежность используемых калибраторов. Именно поэтому в сложных диагностических ситуациях или при глубокой тромбоцитопении в анамнезе для уточнения числа тромбоцитов следует применять микроскопический метод.

Подсчет клеток крови в окрашенных мазках имеет низкую точность и воспроизводимость, поэтому он не может быть рекомендован для применения в современных клиниках.

• Оцените материал

Перепечатка материалов с сайта строго запрещена!

Информация на сайте предоставлена для образовательных целей и не предназначена в качестве медицинской консультации и лечения.

Ручной подсчет тромбоцитов

Принцип. Подсчет количества тромбоцитов на 1000 эритроцитов в окрашенных мазках крови и перерасчет их числа на 1 мкл или 1 л, в соответствии с количеством эритроцитов в этом объеме крови.

Реактивы: 1) 14% раствор сульфата магния; 2) 2,6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА).

Ход определения. В пробирку вносят реактив 1 или 2, взятый капилляром Панченкова до отметки «75», затем добавляют кровь, взятую тем же капилляром до отметки «К (0)». Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе (см. «Окраска мазков крови») в течение 2–3 ч (при использовании реактива 1) или 35–45 мин (при использовании реактива 2).

Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая тромбоциты в тонких местах препарата (эритроциты должны располагаться изолированно друг от друга). Тромбоциты окрашиваются в розовато-фиолетовый цвет, имеют округлую форму, размер 2–4 мкм, в центре клетки отчетливо определяется зернистость - грануломер, периферическая часть имеет более светлую окраску, незернистая - гиаломер.

Подсчет производят следующим образом. В каждом поле зрения микроскопа считают число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов. Для удобства и большей точности счета рекомендуется пользоваться окуляром с уменьшенным полем зрения. При его отсутствии можно уменьшить поле зрения приемом, описанным в «Подсчет ретикулоцитов». Параллельно берут кровь для подсчета числа эритроцитов в камере Горяева.

Расчет. Зная количество эритроцитов в 1 мкл (или 1 л) крови и количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов, легко рассчитать и содержание тромбоцитов в крови:

где X - количество тромбоцитов в 1 мкл (1 л) крови; а - количество тромбоцитов, подсчитанных в мазке крови на 1000 эритроцитов; b - количество эритроцитов в 1 мкл (1 л) крови; 1000 - количество эритроцитов, подсчитанных в мазке крови.

Ручной подсчет тромбоцитов

где Х - число лейкоцитов в 1 мкл крови, а - число лейкоцитов в 100 больших квадратах, 20 - разведение крови, 100- число подсчитанных квадратов, 250 -объем одного большого квадрата 1/250.

Таким образом, количество лейкоцитов, подсчитанных в 100 больших квадратах, умножают на 50.

При наличии в периферической крови ядросодержащих клеток красного ряд, они не лизируются и подсчитываются вместе с лейкоцитами. В этом случае, чтобы определить истинное количество лейкоцитов, из общего числа посчитанных клеток вычитают количество клеток красного ряда.

Например: Общее количество лейкоцитов при подсчете в камере (или на анализаторе) – 45*109/л. При подсчете лейкоцитарной формулы найдено, что на 100 лейкоцитов присутствует 50 эритробластов (нормобластов).

Рассчитываем истинное количество лейкоцитов в крови:

150 клеток (общее количество - 45*109/л (количество клеток в 1 мкл, лейкоцитов и нормобластов, полученное при подсчете в камере полученное при подсчете или на анализаторе)

100 клеток (лейкоциты) - Х (истинный лейкоцитоз крови)

Таким образом, истинное число лейкоцитов в крови составляет 30 * 109/л.

Основные источники ошибок при подсчете лейкоцитов в камере:

Неправильное соотношение объемов крови и уксусной кислоты, взятые в пробирку.

Неправильно подготовленный раствор уксусной кислоты (при концентрации большей, чем 5%, часть лейкоцитов может лизироваться, что приведет к занижению результата).

Длительное нахождение пробы при температуре выше 28°С, что может ускорить лизис

лейкоцитов в образце и привести к занижению результата.

Неправильное заполнение камеры Горяева. Как и при подсчете эритроцитов, камеру необходимо оставлять на 1 минуту для оседания клеток.

Недостаточно хорошо отмытая после предыдущего определения камера Горяева. Оставшиеся в камере лейкоциты могут завышать результаты анализа. (Луговская и др., 2002)

2.3 Методы подсчета количества тромбоцитов.

Для определения количества тромбоцитов используют следующие методы: подсчет в счет ной камере, мазках крови и гематологическом анализаторе. Каждая группа методов имеет преимущества и недостатки.

Подсчет тромбоцитов в камере достаточно точен, не требует для расчета количества эритроцитов. С другой стороны этот метод более трудоемкий, поскольку тромбоциты в нативном виде представлены мелкими и плохо контрастированными элементами. Недостаток метода в необходимости подсчета тромбоцитов в ближайшие часы после взятия крови.

Определение количества тромбоцитов в мазках крови значительно уступает по своей точности камерному методу или автоматическим счетчикам. Ошибки при подсчете в мазках крови могут быть обусловлены плохим качеством мазка и связанным с этим неравномерным распределением тромбоцитов, неточным определением количества эритроцитов крови. Существенное неудобство метода - необходимость одновременного подсчета тромбоцитов и эритроцитов в крови. Преимущество его - возможность исследования тромбоцитов в любое время, независимо от момента взятия крови.

Метод определения тромбоцитов с помощью гематологического анализатора позволяет достаточно точно определить количество тромбоцитов, их средний объем и распределение по объему. (Луговская и др., 2002)

Метод подсчета в камере.

Принцип: Определение количества тромбоцитов в 1 л крови с учетом ее разведения и объема квадрата счетной сетки камеры Горяева с применением фазово-контрастного устройства для контрастирования тромбоцитов.

Реактивы: Применяют 1% раствор оксалата аммония, который быстро и полностью лизирует эритроциты. Раствор кипятят и фильтруют. Хранят в холодильнике.

Ход определения: Исследуемую кровь разводят в 200 раз; для этого в сухую пробирку набирают 4 мл реактива и 0,02 мл крови. Перемешивают и оставляют на 25-ЗО мин для гемолиза эритроцитов. Подготавливают счетную камеру. Перемешивают разведенную кровь и заполняют камеру: подносят каплю крови с помощью стеклянной палочки или пастеровской пипетки к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы кровь равномерно без пузырьков воздуха заполняла всю поверхность сетки, не затекая в бороздки. Помещают счетную камеру во влажную камеру на 5 мин для оседания тромбоцитов (чашка Петри с уложенной по краям смоченной водой фильтровальной бумагой). Подготавливают фазово-контрастное устройство в соответствии с инструкцией, приложенной к нему. Тромбоциты считают в 25 больших квадратах.

Тромбоциты выглядят в счетной камере в виде мелких, хорошо преломляющих свет образований.

Расчет тромбоцитов проводят по формуле:

где Х - число тромбоцитов в 1 мкл крови; а - число тромбоцитов, сосчитанных в 25 больших квадратах,разведение крови, 25 - число сосчитанных квадратов,объем одного большого квадрата 1/250 мкл. Число подсчитанных тромбоцитов умножают на 2000.

Воспроизводимость. Ошибка метода составляет 6,5%. (Клиническая лабораторная аналитика, 1999)

Метод подсчета в мазках крови (по Фонио).

Принцип: Метод основан на подсчете числа тромбоцитов в окрашенных мазках крови на 1000 эритроцитов с расчетом на 1 мкл (или 1 л) крови, исходя из содержания в этом объеме количества эритроцитов.

Реактивы: Применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА).

Ход определения: Реактив набирают в капилляр Панченкова до метки “75 и вносят в пробирку, затем добавляют кровь, взятую тем же капилляром, до метки “0”. Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 2-3 ч (при использовании раствора сульфата магния) и в течениемин (при приме нении ЭДТА). Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая количество тромбоцитов в тонких местах препарата (эритроциты должны быть расположены разрозненно).

Подсчет проводят следующим образом: в каждом поле зрения микроскопа считают число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов.

Расчет: количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов составляет А‰ Зная число эритроцитов в 1 л крови, подсчитывают количество тромбоцитов в 1 л крови.

Например: А=60‰; число эритроцитов 5 *1012/л

Составляют пропорцию:

Х - 5*1012/л, откуда

Нормальные величины тромбоцитов 180,0-320,0 * 109/л

В настоящее время существуют готовые наборы для подсчета тромбоцитов (фирма «Гем»). (Луговская и др., 2002)

Для подсчета и анализа клеток крови используют ручные микроскопические методы и гематологические счетчики разного уровня автоматизации. В настоящее время необходимо внедрение технологий автоматического изучения клеточного состава крови, для того чтобы добиться высокого качества и точности исследований, исключая ошибки, зависящие от работы лаборантов. Клинические лаборатории нуждаются в разработке новых более совершенных методов.

Подсчет тромбоцитов в мазке крови

Подсчет тромбоцитов в мазке крови

Тромбоциты – это дискообразные пластинки, не имеющие ядра, которые находятся в крови человека и вырабатываются клетками костного мозга, а также участвуют в процессе остановки кровотечения.

Уменьшение или увеличение числа клеток является опасным для организма человека, поэтому огромное значение имеет определение количества тромбоцитов.

Методики определения числа клеток

Применяются разные методики подсчета тромбоцитов. Сейчас подсчитывание в мазке крови ведется несколькими способами:

• Подсчитывание по методике Фонио;
• Вычисление количества тромбоцитов камерой с использованием методики Горяева;
• Подсчитывание с помощью автоматических электронных счетчиков;
• С использованием люминесцентного микроскопа.

Болезнь, при которой увеличивается количество клеток, называется тромбоцитоз. При снижении – в крови возникает тромбоцитопения.

Норма у здорового человека:

Подсчитывание числа тромбоцитов по Фонио

Исследование по методике Фонио применяется наиболее часто. Оно базируется на определении количества пластинок в окрашенных мазках крови с использованием химреактивов:

• сульфат магния 14%;
• этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) натрия 6%.

Ход исследования

Сульфат магния или ЭДТА при помощи капилляра Панченкова помещают в стеклянную пробирку, туда же помещают капиллярную кровь, которую берут, используя тот же капилляр.

Кровь с реактивом перемешивают, а затем из полученного раствора готовят материал для определения.

Для этого на предметное стекло наносятся тонкие мазки, они фиксируются и окрашиваются:

• с применением магния сульфата – 2-3 часа;
• с использованием ЭДТА –минут.

После высыхания мазки разглядывают под микроскопом, у которого имеется иммерсионный объектив для увеличения изображения и усиления яркости.

Кровяные пластинки должны располагаться по отдельности, чтобы этого добиться используется самое тонкое место мазка.

Как считать тромбоциты в мазке крови?

Для подсчета мазок передвигается под объективом микроскопа, чтобы были подсчитаны 1000 эритроцитов. Затем считают находящиеся среди них кровяные пластинки.

При известном количестве эритроцитов в одном литре крови, можно произвести подсчет абсолютного числа тромбоцитов.

Определение количества при помощи камеры Горяева

По методу Горяева тромбоцитарные пластинки считает камера с применением цитратного вещества. Число клеток определяют в 1 МК/л или в литре крови.

Для этого используют следующие химреактивы:

Химреактив №1:

• гидрохлорид кокаина 3 г;
• хлорид натрия 0,25 г;
• фурацилин 0,25 г;
• вода 100 мл.

Химреактив №2:

• 1% раствор оксалата аммония. Раствор надо прокипятить, профильтровать и после этого он хранится на холоде. При помощи этого реактива растворение эритроцитов происходит быстрее.

Ход исследования

Используют материал, взятый из вены в пробирку с цитратом. Этим веществом служит ЭДТА. При взятии из пальца тромбоциты могут давать сгустки.

Нужно взять 4 мл химреактива №1 или №2, добавить 0,02 мл крови, получится разведение в 200 раз. Кровь с реактивом слегка взбалтывают, оставляют на полчаса, за это время происходит лизис.

В подготовленную камеру помещают материал из подготовленной крови, а затем опускают во влажную чашку Петри на 5 минут для оседания тромбоцитарных клеток.

В камере клетки хорошо видны, благодаря тому, что используется фазово-контрастные линзы объектива.

Частицы пыли и грязи должны быть хорошо вымыты, чтобы не оставлять след на стеклянной таре и самой камере, иначе их при подсчете можно принять за тромбоциты.

Подсчитывание с помощью счетчиков

Счетчик называется автоматический гематологический аппарат. С его помощью можно определить количество кровяных пластинок, также сделать гистограмму (распространение по величине).

Аппаратное исследование достаточно точное, делается экспресс-методом, который выдает результаты в течение 1 минуты.

Более дешевые модели счетчиков только определяют число, а усовершенствованные приборы делают качественный обзор целого комплекса клеток, куда входит:

При помощи аппаратного гематологического счетчика можно также построить график расположения клеток по размеру.

Методика люминесцентной микроскопии с помощи лампы считается устаревшим. Для определения тромбоцитов получил меньшее распространение и сейчас почти не используется.

Для обзора и подсчитывания клеток крови используют различные методы микроскопического исследования, а также гематологические электронные счетчики.

Внедрение новых технологий для изучения состава клеток позволит исключить ошибки лаборантов и добиться более высокой точности и качества диагностики.

© Лечение тромбов, тромбозов. Копирование материалов разрешается только при оставлении активной ссылки на источник.

Количество тромбоцитов (Plt)

Plt – мелкие клетки-пластинки, быстро реагирующие на воспалительный процесс, активацию свертывания или возникающее кровотечение. Тромбоциты формируют первичный тромб в области повреждения сосуда.

В ручном режиме для подсчета тромбоцитов предполагается взятие отдельной капли крови для изготовления и окраски мазка и последующего подсчета тромбоцитов.

p>В автоматическом режиме при анализе в «RBC-кювете» частицы размером 2–20 фл относятся к тромбоцитам. Полученные необработанные данные проверяются с помощью математических критериев и экстраполируются в виде логарифмически нормального распределения от 0 до 70 фл.

В некоторых анализаторах для более точного подсчета тромбоцитов выполняется обработка пробы специальными антителами, активными в отношении поверхностных рецепторов тромбоцитов.

Пониженные значения – тромбоцитопения – состояние, при котором число тромбоцитов не превышает 150*10 9 /л (150 тыс/мкл). Клинические признаки кровоточивости развиваются при снижении количества тромбоцитов до 50*10 9 /л (50 тыс/мкл). Уменьшение числа тромбоцитов может быть обусловлено:

• повышением разрушения тромбоцитов;
• повышением потребления тромбоцитов;
• недостаточным образованием кровяных пластинок.

Повышенные значения – тромбоцитоз – увеличение количества тромбоцитов в периферической крови более 400*10 9 /л (400 тыс/мкл), могут быть первичными и вторичными.

Первичные тромбоцитозы характерны для всех хронических миелопролиферативных заболеваний (хронический миелолейкоз, идиопатический миелофиброз, эссенциальная тромбоцитемия, эритремия).

Вторичные тромбоцитозы встречаются:

• при острых и хронических воспалительных процессах (ревматоидный артрит, узелковый периартериит, неспецифический язвенный колит, остеомиелит и др.), а также при сепсисе;
• амилоидозе;
• железодефицитных состояниях на фоне хронической кровопотери;
• злокачественных новообразованиях как проявление паранеопластической реакции;
• гемолитической анемии;
• после острой кровопотери, спленэктомии;
• при лечении некоторыми препаратам (витамин В12, андрогены, адреналин, эритропоэтин и др.).

О ВОЗМОЖНЫХ ПРОТИВОПОКАЗАНИЯХ НЕОБХОДИМО ПРОКОНСУЛЬТИРОВАТЬСЯ СО СПЕЦИАЛИСТОМ

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора,18

Центральный офис:, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе энтузиастов», «Перово»

Существует три метода определения количества тромбоцитов:

1) Подсчет тромбоцитов в счетной камере Горяева микроскопией при фазовом контрасте, т.е. с фазовоконтрастной приставкой. Коэффициент вариации 25-30%

2) Подсчет тромбоцитов в мазке крови (по Фонио), Коэффициент вариации 10-15%. Достоинство – возможность оценить морфологические особенности тромбоцитов.

3) Определение количества тромбоцитов на гематологическом анализаторе,

коэффициент вариации 4-10%.

Метод подсчета тромбоцитов в счетной камере Горяева микроскопией при фазовом контрасте, т.е. с фазовоконтрастной приставкой.

Принцип. Производится подсчет тромбоцитов в камере Горяева с применением в качестве разводящей и гемолизирующей жидкости раствора оксалата аммония. При подсчете используют фазовоконтрастную микроскопию.

Реактивы: 1 % раствор оксалата аммония.

Ход определения. Исследование можно проводить как в крови, полученной из пальца, так и в стабилизированной цитратом венозной крови. В последнем случае полученный при подсчете результат умножают на коэффициент 1,1 (учитывают разведение венозной крови раствором цитрата натрия – 9:1). Самым удобным и достаточно точным является способ разведения крови в пробирках (не в меланжере). Для этого, в предварительно высушенную чистую силиконированную или пластиковую (полистирол) пробирку пипеткой отмеривают 1,98 мл 1% оксалата аммония и осторожно вносят в нее 0,02 мл крови. В течение 1-2 мин содержимое пробирки тщательно перемешивают без вспенивания. Заполняют две камеры Горяева и на 10-15 мин помещают их для оседания тромбоцитов во влажную камеру (чашку Петри со смоченной фильтровальной бумагой или марлей). В каждой камере подсчитывают тромбоциты в 25 больших квадратах.

Фазовоконтрастная микроскопия проводится при помощи обычного микроскопа, осветителя типа ОИ-19 (или аналогичного) и устройства для наблюдения методом фазового контраста КФ-1 или КФ-4 .

Метод подсчета тромбоцитов в мазках крови (по Фонио)

Принцип. Метод основан на подсчете числа тромбоцитов в окрашенных мазках крови на 1000 эритроцитов с расчетом на 1 мкл (или 1 л) крови, исходя из содержания в этом объеме количества эритроцитов.

Реактивы: Применяют 6% раствор этилендиаминтриацетата натрия (ЭДТА).

Ход определения. Смешивают кровь с раствором ЭДТА, для этого взятый капилляром Панченкова реактив до метки «75» вносят в пробирку, затем добавляют кровь, взятую до метки «0». Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 30-45 минут (обычно окраска тромбоцитов занимает в 1,5 – 2 раза больше времени, чем окраска мазка для подсчета формулы крови). Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая тромбоциты в тонких местах препарата (эритроциты должны быть расположены изолировано). Подсчет производят следующим образом: в каждом поле зрения считают количество эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов.

Расчет: Количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов составляет А0/00. Зная число эритроцитов в 1 мкл (в 1 л) крови, легко подсчитать количество тромбоцитов в 1 мкл крови (в 1 л).

Например. А=600/00 ; число эритроцитов 5 000000 в 1 мкл (5*106/мкл или 5*1012/л)

Составляют пропорцию:

Х – 5000000,откуда

Х= 60*5*1000000/1000=300*1000 мкл (300*103/мкл или 300*109/л).

Определение количества тромбоцитов с помощью гематологического анализатора

В настоящее время все шире используются определение количества тромбоцитов и их распределение по величине (гистограмма) с помощью автоматических счетчиков крови, или гематологических анализаторов. Эти аппараты точны, и позволяют проводить экспресс-диагностику (определения выполняются за 1 мин).

Подсчет тромбоцитов проводят согласно инструкции к аппарату. Бюджетные модели гематологических анализаторов определяют только количество тромбоцитов, а более совершенные приборы содержат полный анализ тромбоцитарного звена, и позволяют говорить о морфологии тромбоцитов. Развернутый анализ тромбоцитов на анализаторе позволяет определить такие показатели:

РLТ – количество тромбоцитов.

Норма от 180-320109/л; При выходе за эти пределы необходима микроскопия мазка.

MPV – средний объем тромбоцитов. «Молодые» тромбоциты имеют больший объем. MPV увеличивается с возрастом. Норма: 8,6-8,9 фл у детей 1 – 5 лет; 9,5-10,6 фл у людей старше 70 лет.

PDV ширина распределения тромбоцитов по объему отражает степень анизоцитоза тромбоцитов. Норма = 14-18%.

РСТ – тромбокрит доля объема цельной крови, занимаемая тромбоцитами (аналогичен Hct). Норма = 0,15-0,40%.

Также гематологический анализатор строит график распределения тромбоцитов по размеру .

Прочитайте: A. при наличии определенного количества однородных (по полезности или доходности) объектов недвижимости самым высоким спросом будут пользоваться объекты с наименьшей ценой B. активаци свёртывания крови вследствие снижения выработки гепарина C) Иммуноглобулины плазмы крови, синтезируемые плазмоцитами, способные специфически взаимодействовать с генетически чужеродной субстанцией, C) Иммуноглобулины плазмы крови, синтезируемые плазмоцитами, способные специфически взаимодействовать с генетически чужеродной субстанцией, C) Иммуноглобулины плазмы крови, синтезируемые плазмоцитами, способные специфически взаимодействовать с генетически чужеродной субстанцией, D. Управление потоком крови с помощью аорты и промывание органов

Исследуемый образец. Капиллярная кровь.

Принцип метода. Тромбоциты подсчитываются в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза на 1000 эритроцитов с последующим пересчетом на 1 л крови.

Реактивы и оборудование. Микроскоп. Пробирки (1х10 см), пипетки от аппарата Панченкова, 14% раствор сульфата магния или 6% водный раствор этилен-диаминотетраацетата натрия (ЭДТА), метиловый спирт.

Выполнение метода. Капилляром Панченкова набирают раствор сульфата магния или ЭДТА до метки “75” и вносят в пробирку. Туда же вносят кровь, взятую из пальца аппаратом Панченкова до метки “0”. Содержимое тщательно перемешивают. Из смеси готовят тонкие мазки, фиксируют их метиловым спиртом 10 минут и окрашивают по Романовскому-Гимза. В каждом поле зрения микроскопа подсчитывают число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов.

Рисунок 10. Тромбоциты периферической крови в окрашенном мазке.

Оценка результатов. Зная количество эритроцитов в 1 л, рассчитывают число тромбоцитов. Пределы колебаний количества тромбоцитов, определенного этим методом, и трактовка результатов совпадают с результатами фазово-контрастного микроскопирования.

Примечания. Мазки окрашиваются 2 - 3часа, если используется сернокислая магнезия и 35 - 40 минут, если употребляется ЭДТА.

2.2.3. Подсчет тромбоцитов с использованием гематологических анализаторов.

Данный метод находит в последние годы все большее применение в клинической практике, поскольку автоматический подсчет клеток с использованием современных электронных приборов значительно облегчает и ускоряет исследование. Кроме того, помимо подсчета количества тромбоцитов (PLT), анализаторы способны определять несколько тромбоцитарных индексов:

· MPV - средний объем тромбоцитов - данный показатель увеличивается с возрастом: с 8,6 - 8,9 фл у детей 1 - 5 лет до 9,5 - 10,6 фл у людей старше 70 лет. "Молодые" кровяные пластинки имеют больший объем, поэтому при ускорении тромбоцитопоэза средний объем тромбоцитов возрастает. Увеличение показателя MPV наблюдается у больных с идиопатической тромбоцитопенической пурпурой, тиреотоксикозом, сахарным диабетом, миелопролиферативными заболеваниями, атеросклерозом; а также у курильщиков и лиц, злоупотребляющих алкоголем. Снижение наблюдается после спленэктомии, при синдроме Вискотта-Олдрича.

· PDV - распределение тромбоцитов по объему - измеряется в процентах (коэффициент вариации тромбоцитометрической кривой) и количественно отражает гетерогенность популяции этих клеток по размерам (степень анизоцитоза тромбоцитов). В норме показатель составляет 1-20%. Результаты могут быть выражены в виде кривой - тромбоцитарной гистограммы. Наличие в крови преимущественно молодых форм (макротромбоцитоз) приводит к сдвигу гистограммы вправо; старые формы с меньшими размерами находятся в гистограмме слева. (рисунок 11).

Рисунок 11. Тромбоцитарная гистограмма (а ) в норме; (б) тромбоцитопения; (в ) гипертромбоцитоз, макротромбоцитоз.

· РСТ - тромбокрит - отражает долю объема цельной крови, занимаемую тромбоцитами. Он аналогичен гематокриту и выражается в процентах. В норме тромбокрит составляет 0,15 - 0,40%.

2.3. Морфологический анализ тромбоцитов (тромбоцитарная формула).

Принцип метода. Для постановки диагноза тромбоцитопатии кроме подсчета количества тромбоцитов необходимо изучить их размеры, форму и структуру. Последняя наиболее хорошо выявляется после паноптической окраски тромбоцитов по Нохту (смесью азура и эозина).

Реактивы. Абсолютный метиловый спирт, который получают добавлением в сосуд с продажным метиловым спиртом просушенного до постоянного веса химически чистого медного купороса. Сосуд герметически закупоривается. Перед употреблением готовят смесь красок из 10 частей раствора азура, 5 частей раствора эозина и 10 частей водопроводной воды. Азур II и эозин используются в разведении 1:1000.

Ход определения. Мазки готовятся без стабилизатора (ЭДТА или сернокислой магнезии). Их фиксируют 15 минут в абсолютном метиловом спирте и красят 45 минут смесью красок.

Оценка результатов. Если в мазке некоторые тромбоциты образуют скопления по 5-6 пластинок, считается, что это хорошая агрегация.

Тромбоциты здорового человека обычно округлые ли овальные. 90 - 92% из них являются нормотромбоцитами (их диаметр в 3 - 3,5 раза меньше диаметра эритроцитов здорового человека и составляет 1,5 - 3 мкм). 8 - 12% тромбоцитов относятся к микропластинкам (диаметр 1 - 1,5 мкм), макропластинкам (диаметр 3,5 - 5 мкм) и мегатромбоцитам (6 - 10 мкм) (рис.12 ).

Структура тромбоцитов отражает степень их зрелости. Различают юные, зрелые и старые кровяные пластинки. Не всегда встречаются в крови здорового человека тромбоциты раздражения и дегенеративные пластинки.

Юные формы тромбоцитов отличаются от зрелых несколько большей величиной (2 - 5 мкм), нерезкими контурами, выраженной базофилией гиаломера и нежной необильной азурофильной зернистостью.

Зрелые формы - наиболее типичные - округлые или овальные, с ровными контурами, диаметром 2 - 4 мкм, в них четко разделяются грануломер с хорошо выраженной красно-фиолетовой зернистостью и голубовато-розовый (сиреневый) гиаломер.

Рисунок 12. Семь малых, два больших и два мегатромбоцита в мазке периферической крови.

У старых форм тромбоцитов насыщенно-фиолетовый грануломер на всю центральную часть кровяной пластинки и светло-розовый узкий гиаломер по периферии. Пластинки как бы сморщены, диаметр составляет 0,5 - 2,5 мкм.

Тромбоцитам раздражения свойственны большой полиморфизм и значительная величина. Встречаются гигантские колбасовидные, хвостатые и т.п. пластинки диаметром 7 - 9 и даже

12 мкм (рис. 13 А, Б ).

Рисунок 13. Гигантские аномальные тромбоциты в мазках периферической крови.

Дегенеративные формы не содержат зернистости (гиалиновые, голубые пластинки) или имеют темно-фиолетовую зернистость в виде комков или мелких осколков (пылинок), встречаются и вакуолизированные пластинки.

Практическое значение. Тромбоцитарная формула здоровых людей: юные 0 - 0,8%; зрелые 90 - 95%; старые 2 - 5,5%; дегенеративные - 0 - 0,2%; раздражения 0,8 - 2,5%; вакуолизированные - 0%.

Повышение числа юных форм (“омоложение” или сдвиг тромбоцитарной формулы влево) отмечается при повышении регенерации костного мозга (гемолитическом кризе, посттрансфузионных осложнениях, лейкозе, после кровопотери, спленэктомии и др.).

Большое число старых форм (“постарение” или сдвиг тромбоцитарной формулы вправо) чаще всего обнаруживается у больных раком. Формы раздражения присущи тромбоцитопеническим состояниям. Количество старых и дегенеративных форм увеличивается у больных наследственными и симптоматическими тромбастениями, циррозом печени, при отравлении бензолом.

При миелопролиферативных заболеваниях (хроническом миелолейкозе, тромбоцитемии, полицитемии и др.) в периферической крови наряду с формами раздражения встречаются “тромбобласты” - фрагменты ядер мегакариоцитов, которые окружены цитоплазмой с отшнуровывающимися пластинками.

Норма: 180–320×109/л (200–400×109/л)
Тромбоциты (кровяные пластинки) - это безъядерные клетки диаметром 2–4 мкм, являющиеся «осколками» цитоплазмы мегакариоцитов костного мозга.

Морфология тромбоцитов

В крови здорового человека при световой микроскопии (окраска
по методу Романовского - Гимза) различают четыре основные формы тромбоцитов:

1. Нормальные (зрелые) тромбоциты (87,0 ± 0,13 %) - круглой или овальной формы диаметром 3–4 мкм; в них видна бледно-голубая наружная зона (гиаломер) и центральная (грануломер) с азурофильной зернистостью.

2. Юные (незрелые) тромбоциты (3,20 ± 0,13 %), несколько больших размеров с базофильной цитоплазмой, азурофильная грануляция (мелкая и средняя) располагается чаще в центре.

3. Старые тромбоциты (4,10 ± 0,21 %) могут быть круглой, овальной, зубчатой формы с узким ободком тем ной «цитоплазмы», с обильной грубой грануляцией, иногда наблюдаются вакуоли.

4. Формы раздражения (2,50 ± 0,1 %) больших размеров, вытянутые, колбасовидные, хвостатые, «цитоплазма» в них голубая или розовая, азурофильная зернистость рассеяна или разбросана неравномерно.

Гиаломер тромбоцитов (основа пластинки) ограничен трехслойной мембраной, которая, по-видимому, идентична мембране других клеток кроветворной ткани. Мембрана клетки инвагинирует и соединяется с сетью многочисленных каналов (так называемая открытая канальцевая система - ОКС), которые тесно переплетены внутри тромбоцита.

Наружная клеточная оболочка и ОКС усеяны гликопротеинами, играющими важную роль в адгезии и агрегации тромбоцитов.

В цитоплазме тромбоцитов можно обнаружить 4 вида гранул различной структуры, формы и величины, равномерно распределенные в кровяной пластинке или чаще собранные в ее центре (грануломер).

Наиболее многочисленные α-гранулы содержат тромбоцитоспецифические и тромбоцитонеспецифические пептиды, участвующие в механизмах коагуляции, воспаления, иммунитета и репарации.

Плотные гранулы представляют собой богатое хранилище АДФ и серотонина - веществ, способствующих агрегации тромбоцитов; а также антиагреганта АТФ и основного кофактора коагуляции Са2+. Лизосомальные гранулы содержат гидролитические ферменты, а пероксисомы - каталазу.

Функции тромбоцитов

Основные функции тромбоцитов

• Запуск немедленного гемостаза за счет адгезии и агрегации тромбоцитов, что приводит к формированию тромбоцитарной пробки;
• местное выделение вазоконстрикторов для уменьшения кровотока в пораженном участке;
• катализ реакций гуморальной системы свертывания с образованием в конечном счете фибринового сгустка;
• инициирование репарации ткани;
• регулирование местной воспалительной реакции и иммунитета.

Нестимулированные тромбоциты циркулируют в виде гладких дискоидных клеток с незначительной метаболической активностью. Такие тромбоциты не вступают в физиологически значимое взаимодействие с другими форменными элементами крови или монослоем эндотелиальных клеток.

Физиологическая активация тромбоцитов начинается только тогда, когда поврежден сосудистый эндотелий и обнажен субэндотелиальный внеклеточный матрикс. В тромбоцитарной мембране возникают волны возбуждения и формируется большое количество коротких нитевидных псевдоподий или филоподий. В результате этого процесса значительно увеличивается площадь поверхности мембраны, что необходимо для катализа реакций гуморальной системы. С инициированием активации тромбоцитов внутриклеточные органеллы сосредотачиваются в центре клетки, после чего происходит слияние мембран плотных и α-гранул друг с другом, с клеточной мембраной и с мембранами ОКС. Это приводит к экзоцитозу содержимого гранул в наружную микросреду. Происходящий в это время каскад аутоактивации тромбоцитов, синтез ромбоксана и выделение содержимого гранул приводят к появлению тромбоцитарного агрегата, прошитого фибриногеновыми мостиками с участием гликопротеина мембранных рецепторов соседних тромбоцитов.

Известно, что мегакариоциты синтезируют и депонируют в α-гранулах факторы свертывания V, VIII, XIII и фибриноген, которые выбрасываются в микросреду при активации тромбоцитов. Тромбоцитарные мембраны играют не менее важную роль в запуске специфических реакций свертывания.

Методы подсчета тромбоцитов

Метод Фонио

Наиболее распространенный метод подсчета тромбоцитов - метод Фонио (готовят мазок и красят его по Романовскому - Гимза; считают количество тромбоцитов, встретившихся при подсчете 1000 эритроцитов).

Подсчета тромбоцитов в камере Горяева

Существует также метод подсчета тромбоцитов в камере Горяева: кровь разводят 1% раствором оксалата аммония, или раствором, приготовленным по сложной прописи (см. ниже), или 5–7% раствором трилона Б (для предотвращения свертывания крови и агглютинации кровяных пластинок), заполняют камеру и подсчитывают тромбоциты по обычному правилу.

Метод люминесцентной микроскопии

Меньшее распространение получили методы определения количества тромбоцитов с помощью люминесцентной микроскопии.

Метод подсчета с использованием электронно-автоматических счетчиков

В настоящее время наиболее перспективен метод подсчета с использованием электронно-автоматических счетчиков в разведенной пробе после лизиса эритроцитов (для подтверждения данных лабораторного анализа необходимо исследовать мазок периферической крови).

Количественное определение тромбоцитов

Количественное определение тромбоцитов по методу Фонио

• Капилляром Панченкова набирают 14% раствор сернокислого магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в количестве 25 мкл (до метки «75») и вносят в пробирку;
• кровь из пальца набирают полный капилляр (до метки «0») и выливают всю кровь в пробирку;
• содержимое пробирки тщательно перемешивают и из смеси готовят мазок, который фиксируют и окрашивают по Романовскому - Гимза. Если в качестве стабилизатора был взят раствор сернокислого магния, то продолжительность окраски составляет 2–3 часа, а при использовании раствора ЭДТА - 30–45 минут;
• наносят на край мазка - в тонкой его части - иммерсионное масло;
• считают количество тромбоцитов, встретившихся при подсчете 1000 эритроцитов; при подсчете, чтобы не сбиться, рекомендуется прибегать к ограничению поля зрения путем применения окуляров, поле зрения которых разделено сеткой.

Зная количество эритроцитов в 1 мкл крови и число тромбоцитов на 1000 эритроцитов, вычисляют количество тромбоцитов в 1 мкл крови.

где Э - число эритроцитов в 1 мкл.

Количественное определение тромбоцитов в камере Горяева

• В пробирку наливают 4 мл раствора, приготовленного по сложной прописи (3 г кокаина солянокислого, 0,25 г хлористого натрия, 0,025 г фурацилина, 100 мл дистиллированной воды)* или 4 мл 1% раствора оксалата аммония;

* На практике в клинических лабораториях, ввиду принадлежности кокаина к наркотическим веществам, используют пропись следующего состава: новокаина гидрохлорида 3,5 г; натрия хлорида 0,25 г; воды дистиллированной до 100 мл. Время гемолиза эритроцитов составляет около 60 мин.

• капиллярной пипеткой набирают 20 мкл крови, осторожно выдувают ее в пробирку с реактивом и ополаскивают пипетку. Смесь хорошо перемешивают и оставляют на 25–30 минут для гемолиза эритроцитов;
• после повторного перемешивания заполняют камеру Горяева, которую помещают во влажную камеру;
• через 5 минут производят подсчет количества тромбоцитов в 25 больших квадратах с использованием фазово-контрастного устройства.

Формула для подсчета тромбоцитов:

где а - количество тромбоцитов в 400 малых квадратах;
П - степень разведения (200).

Количественное содержание тромбоцитов

Норма: 180–320 × 109/л (200–400 × 109/л)

Увеличением количества тромбоцитов характеризуются:

• миелопролиферативные процессы (эритремия, миелофиброз);
• хронические воспалительные заболевания (ревматоидное поражение суставов, язвенный колит, туберкулез, остеомие лит, цирроз печени);
• злокачественные новообразования (рак, лимфома, лим фо гра нуле матоз);
• кровотечения, гемолитическая анемия;
• период выздоровления при мегалобластных анемиях;
• после операций;
• состояние после спленэктомии;
• лечение кортикостероидами.

Уменьшением количества тромбоцитов (тромбоцитопенией) характеризуются:

• наследственные тромбоцитопении, вызванные снижением образованиятромбоцитов(врожденнаятромбоцитопения, синдром Уискотта-Олдрича, синдром Бернара - Сулье, аномалия Чедиака - Хигаси, синдром Фанкони, краснуха новорожденных, гистиоцитоз);
• болезни крови (апластическая анемия, мегалобластные анемии, лейкозы);
• поражение костного мозга (метастазы новообразований, туберкулезное поражение, ионизирующее облучение);
• другие заболевания (циклическая тромбоцитопения, пароксизмальная ночная гемоглобинурия, гемолитико-уремический синдром, почечная недостаточность, заболевания печени, опухоли сосудов, селезенки, эклампсия, гипертиреоз, гипотиреоз);
• инфекции (вирусные, бактериальные, риккетсиозы, маля рия, токсоплазмоз, ВИЧ-инфекция);
• беременность, менструации;
• действие лекарственных препаратов (цитостатиков, анальгетиков, антигистаминных средств, антибиотиков, психотропных лекарств, диуретиков, противосудорожных средств, витамина К, резерпина, дигоксина, гепарина, нитроглицерина, преднизолона, эстрогенов и др.);
• действие алкоголя, тяжелых металлов;
• тромбоцитопении, вызванные повышенным потреблени ем тромбоцитов (тромбоцитопеническая пурпура, гиперспленизм, ДВС-синдром, кровотечения, гемодиализ).

Кровяные пластинки обладают групповой специфичностью, соответствующей групповой специфичности эритроцитов. Это должно учитываться при переливании тромбоцитарной массы.

Тромбоциты по Фонио — анализ, позволяющий определить точное количество тромбоцитов в крови и узнать причины многих заболеваний. Эти кровяные клетки являются важным фактором сворачивания крови.

Рассмотрим, в чем состоит суть такого метода анализа крови и о чем говорят его показатели.

Суть метода Фонио, алгоритм анализа

Многие пациенты не знают, что это такое — подсчет тромбоцитов по указанному методу. Подсчет тромбоцитов по Фонио осуществляется на одну тысячу эритроцитов в мазках крови, окрашенных специальным красителем. Затем полученное количество пересчитывается в соотношении на 1 литр или 1 мкл.

Метод позволяет максимально точно узнать количество этих кровяных телец, что, в свою очередь, повышает точность диагноза.

Как делается анализ

Общее число этих клеток в определенном объеме крови называется коагулограммой. Кровь берется из пальца. Сдать ее для анализа надо каждому обследуемому человеку, ведь такой показатель способен помочь врачу определить многие опасные патологии.

При сдаче крови на тромбоциты необходимо учитывать следующее:

1. Их показатель оказывается максимальным после физических перегрузок и приема еды. Вот почему сдача материала должна проводиться не ранее чем через восемь часов после последнего приема пищи.
2. То же относится и к физической нагрузке: если анализ делается в состоянии возбуждения человека или обследуемый недавно занимался тяжелым физическим трудом, результаты могут быть неточными.
3. Анализ берется утром.
4. Чтобы точность анализа была максимальной, процедуру надо повторить еще два раза с перерывом в 3-5 суток.

Как считаются результаты

Чтобы провести подсчет по методу Фонио, необходим 14%-й раствор магния сульфата и 2,6%-й раствор натрия этилендиаминтетраацетата. Реактивы берутся с помощью капилляра Панченкова.

1. В пробирку вводится один из реактивов, в капилляре его должно быть до уровня «75». Туда же добавляется кровь, взятая тем же сосудом (ее должно быть до отметки «К».).
2. Компоненты надо тщательно перемешать и приготовить тонкие мазки.
3. Они окрашиваются по методу Романовского-Гимзе в течение двух-трех часов, если был взят сульфат магния, или на протяжении 35-45 минут, если был взят ЭДТА. В это время происходит окрашивание тромбоцитов. Они будут окрашены в фиолетово-розовый оттенок.

Как считаются тромбоциты? Для этого в поле зрения микроскопа производится подсчет эритроцитов и тромбоцитов до 1 тысячи красных кровяных телец. Количество тромбоцитов в крови можно узнать, умножив их число в мазке на количество эритроцитов в 1 мкл и разделив полученное произведение на 1000. Специфическая окраска клеток помогает врачу более точно подсчитать число анализируемых клеток.

Анализ крови по Фонио отличается высокой точностью, поэтому много специалистов пользуется именно данными, полученными данной методикой.

Особенность метода Фонио

Эта методика является самой распространенной на сегодняшний день. Главное отличие этого метода от других в том, что содержание форменных элементов учитывается в мазке (он является окрашенным).

Достоинства данного метода в следующем:

• лаборант может хорошо видеть все клетки в мазке;
• кровь обследуется в какое угодно время, без привязки к моменту получения образца крови;
• формула подсчета количества клеток достаточно проста, кроме того, это количество зависит от тысячи красных кровяных телец в микролитре.

О чем говорят низкие показатели

Если тромбоциты у человека понижены, это говорит о развивающейся тромбоцитопении. Она бывает:

• при воздействии радиационного излучения;
• при отравлении свинцом и другими веществами;
• при разных болезнях системы крови;
• если у человека развиваются коллагенозы;
• при развитии хронического нефрита.

У людей с низким количеством тромбоцитов часто бывают внутренние кровотечения, кровоподтеки и гематомы, что является следствием понижения эластичности сосудов. Также обращают на себя внимание петехии, то есть точечные кровотечения.

О чем говорят повышенные показатели тромбоцитов

Повышение количество тромбоцитов в крови (тромбофилия) наблюдается в таких случаях:

• употребление некоторых лекарств;
• если пациенту была сделана хирургическая операция;
• если у человека была удалена селезенка;
• после травм, если они сопровождались большой кровопотерей;
• при развитии у человека злокачественных новообразований;
• при железодефицитной анемии.

Если тромбоциты у человека повышены, это очень опасно для его здоровья и жизни . В таком случае существенно повышается риск развития тромбоза. При этом внутри сосуда образуется сгусток крови, препятствующий нормальному кровотоку.

Особенно опасным считается повышение количества этих клеток у беременных. Это может иметь крайне неприятные последствия:

• выраженный токсикоз беременных;
• прерывание беременности;
• выраженная задержка плода;
• варикоз беременных;
• тромбоз ног у беременных;
• рост кровяного сгустка внутри сосуда (тромбоэмболия);
• инфаркт.

При таких патологиях, как воспаление оболочек мозга, печени, легких, токсоплазмоз, также повышается количество тромбоцитов. Такому состоянию сопутствует и повышение уровня лейкоцитов.

Нормы у женщин, мужчин и детей

Норма тромбоцитов по методу Фонио — от 120 до 400 тысяч в одном кубическом миллиметре крови. Однако у тех или иных групп населения полученные при анализе показатели будут существенно отличаться. Такие отличия являются вариантами нормы.

Итак, норма у детей от одного года — от 180 до 320 тысяч в одном миллиметре кубическом. У новорожденных детей нормальные пределы показателей тромбоцитов немного шире — от 100 до 420 тысяч в одном кубическом миллиметре крови.

У мужчин число тромбоцитов колеблется от 180 до 400 тысяч. Максимальное их количество наблюдается в 40-летнем возрасте. Далее происходит некоторое снижение количества тромбоцитов, однако оно не опускается ниже 320 тысяч.

Норма у женщин — 180-340 тысяч указанных элементов крови. Максимальное же количество бывает в 16 лет. Во время менструаций нормальный показатель этих клеток падает до 150 тысяч. У подростков это число может снизиться даже до 75 тысяч.

Какие факторы влияют на количество тромбоцитов

К увеличению тромбоцитов причастны многие факторы. Так, все острые инфекции в организме неизбежно ведут к повышению количества этих форменных элементов крови. То же происходит и при нарушениях системы кроветворения, онкологических патологиях.

Если человек часто переживает стресс, это тоже влияет на количество тромбоцитов в крови. Некоторым может показаться странным то, что при кровопотерях число таких форменных элементов растет. Но так человеческий организм пытается компенсировать потери крови.

Повышенные тромбоциты бывают и у лиц, длительно употребляющих алкоголь.

Если же человек длительно и бесконтрольно принимает препараты, обладающие тромбоцитопеническими свойствами, то в итоге картина его крови существенно изменяется. Это же бывает и при поражении многих органов, в частности, щитовидной железы, печени и др. Иногда кровотечение из носа или порез может отрицательно сказаться на количестве тромбоцитов и снизить их количество.

Как нормализовать показатели тромбоцитов

Меры по нормализации количества этих форменных элементов будут существенно отличаться в зависимости от того, какие результаты получены в ходе анализа. Но все меры будут бесполезными, если на организм продолжают воздействовать вредные факторы. Их надо устранить в первую очередь . Надо стараться избегать эмоциональных и физических перегрузок.

Итак, повысить количество тромбоцитов можно такими способами:

1. Исключить из рациона соления, спиртное, морскую капусту, виноград (красный).
2. Включить в рацион такие продукты, как свежая рыба, печень, перец болгарский, яблоки, гречку.
3. Врач назначит необходимые лекарства для подъема количества тромбоцитов в крови. Самолечение ими категорически запрещается!
4. Не использовать те лекарства, которые в качестве своих побочных эффектов имеют тромбоцитопению.
5. Принимать витамины, такие как А, группы В, С.

Чтобы снизить количество этих форменных элементов крови, надо в первую очередь наладить образ жизни и уменьшить количество стрессов. Нельзя заниматься травмоопасными видами спорта.

Чтобы понизить количество этих клеток крови, нужно:

• употреблять препараты ацетилсалициловой кислоты в рекомендованных врачом дозах;
• отказаться от плодов шиповника, бананов, манго, граната, потому что такие продукты повышают число тромбоцитов;
• ввести в рацион побольше клюквы, черники, облепихи, свеклы и других продуктов;
• принимать поливитамины и препараты магния;
• соблюдать суточное количество воды и не допускать обезвоживания.

Как видим, метод подсчета тромбоцитов по Фонио отличается высокой точностью. И если анализ показал расхождения с нормой, можно быстро и эффективно скорректировать показатель этих форменных элементов крови и не допустить опасных последствий.

Если же не устранять нарушения, связанные с отклонениями количества таких клеток от нормы, возможно развитие очень серьезных патологий.