III. μέθοδοι εργαστηριακής διάγνωσης ελμινθιασών. Εξέταση των κινήσεων του εντέρου

7.7. Μέθοδοι για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών και των προνυμφών των ελμινθών

Η βιωσιμότητα των αυγών ελμινθών καθορίζεται από εμφάνιση, με χρώση με ζωτικές βαφές, με καλλιέργεια σε βέλτιστες συνθήκεςκαι τη δημιουργία βιολογικού δείγματος.

7.7.1. Προσδιορισμός της βιωσιμότητας αυγών ή προνυμφών ελμινθών με εμφάνιση

Τα αυγά ελμινθίου μικροσκοπούνται πρώτα σε χαμηλή μεγέθυνση και μετά σε μεγάλη μεγέθυνση. Σε παραμορφωμένα και νεκρά αυγά ελμινθών, το κέλυφος είναι σχισμένο ή λυγισμένο προς τα μέσα, το πλάσμα είναι θολό, χαλαρό. Στα τεμαχισμένα αυγά, οι σφαίρες διάσπασης (βλαστομερή) είναι άνισου μεγέθους, ακανόνιστου σχήματος και συχνά μετατοπίζονται σε έναν πόλο. Μερικές φορές υπάρχουν μη φυσιολογικά ωάρια, τα οποία, έχοντας εξωτερικές παραμορφώσεις, αναπτύσσονται φυσιολογικά. Στις ζωντανές προνύμφες των στρογγυλών σκουληκιών, η λεπτή κοκκοποίηση υπάρχει μόνο στο μεσαίο μέρος του σώματος, καθώς πεθαίνουν, εξαπλώνεται σε όλο το σώμα, εμφανίζονται μεγάλα γυαλιστερά υαλώδη κενοτόπια, οι λεγόμενες "χορδές από μαργαριτάρια".

Για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των ώριμων αυγών ασκαριδών, μαστιγίων, σκουληκιών καρφίτσας, οι ενεργές κινήσεις των προνυμφών πρέπει να προκαλούνται με ελαφρά θέρμανση του παρασκευάσματος (σε θερμοκρασία που δεν υπερβαίνει τους 37 ° C). Είναι πιο βολικό να παρατηρήσετε τη βιωσιμότητα των προνυμφών ascaris και whipworm αφού απομονωθούν από το κέλυφος του αυγού πιέζοντας το γυαλί κάλυψης του παρασκευάσματος με βελόνα ή τσιμπιδάκια ανατομής.

Σε επεμβατικές προνύμφες ασκαριδών, παρατηρείται συχνά ένα καπάκι που έχει απολεπιστεί στο άκρο της κεφαλής και σε προνύμφες μαστιγίων που έχουν ολοκληρώσει την ανάπτυξη στο αυγό, σε αυτό το σημείο βρίσκεται ένα στυλεό σε μεγάλη μεγέθυνση. Οι νεκρές προνύμφες των ελμινθών, ανεξάρτητα από τη θέση τους (στο αυγό ή έξω από αυτό), παρατηρούν τη φθορά του σώματος. Σε αυτή την περίπτωση, η εσωτερική δομή της προνύμφης γίνεται άμορφη ή κοκκώδης και το σώμα γίνεται θολό και αδιαφανές. Τα κενοτόπια βρίσκονται στο σώμα και τα σπασίματα στην επιδερμίδα.

Η βιωσιμότητα των ογκόσφαιρων τενιειδών (βόειος, χοίρειο ταινία κ.λπ.) καθορίζεται από την κίνηση των εμβρύων όταν εκτίθενται σε πεπτικά ένζυμα. Τα αυγά τοποθετούνται σε γυαλί ρολογιού γαστρικό υγρόσκύλους ή τεχνητό χυμό δωδεκαδακτύλου. Η σύνθεση του τελευταίου: παγκρεατίνη - 0,5 g, διττανθρακικό νάτριο - 0,09 g, απεσταγμένο νερό - 5 ml. Τα ποτήρια ρολογιού με αυγά τοποθετούνται σε θερμοστάτη στους 36 - 38 ° C για 4 ώρες. Σε αυτή την περίπτωση, τα ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τις μεμβράνες. Τα κελύφη των ζωντανών ογκόσφαιρων διαλύονται επίσης σε οξινισμένη πεψίνη και σε αλκαλικό διάλυμα θρυψίνης μετά από 6-8 ώρες σε θερμοστάτη στους 38 °C.

Εάν τα αυγά teniid τοποθετηθούν σε διάλυμα θειούχου νατρίου 1% ή σε διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου 20%, ή σε διάλυμα χλωριούχου νερού 1% στους 36 - 38 ° C, ώριμα και ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τα κελύφη και δεν αλλαγή κατά τη διάρκεια 1 ημέρας. Τα ανώριμα και νεκρά ογκόσφαιρα συρρικνώνονται ή διογκώνονται και μεγεθύνονται δραματικά και στη συνέχεια «διαλύονται» μέσα σε 10 λεπτά έως 2 ώρες. Ζωντανά έμβρυα τενιειδών κινούνται επίσης ενεργά σε ένα μείγμα διαλύματος χλωριούχου νατρίου 1%, διαλύματος διττανθρακικού νατρίου 0,5% και χολής στους 36 - 38 ° C.

Η βιωσιμότητα της fasciolia adolescariae που συλλέγεται από φυτά και άλλα αντικείμενα υδάτινων σωμάτων ελέγχεται εξετάζοντάς τα σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα σε φυσιολογικό ορό κάτω από μικροσκόπιο με στάδιο θέρμανσης. Όταν θερμαίνονται, οι προνύμφες τρηματωδών στην κύστη αρχίζουν να κινούνται.

Για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών του πυγμαίου ταινίας, η μέθοδος της Ionina N.S. είναι η απλούστερη: στα ζωντανά αυγά, το διάμεσο ζεύγος των εμβρυϊκών αγκίστρων είναι είτε παράλληλο με τα πλευρικά, είτε τα τελευταία σχηματίζουν γωνία στη βάση μικρότερης από 45 ° με τη διάμεσο. Στα νεκρά αυγά, τα πλευρικά ζεύγη σχηματίζουν μια γωνία στη βάση με ένα διάμεσο ζεύγος μεγαλύτερη από 45 ° ή τα άγκιστρα είναι τυχαία διασκορπισμένα (η ζευγαρωμένη διάταξη τους χάνεται). μερικές φορές υπάρχει ρυτίδωση του εμβρύου, σχηματισμός κοκκοποίησης. Μια πιο ακριβής μέθοδος βασίζεται στην εμφάνιση των κινήσεων της ογκόσφαιρας κατά τη διάρκεια μιας απότομης αλλαγής της θερμοκρασίας: από 5 - 10 ° σε 38 - 40 ° C.

Ο προσδιορισμός της βιωσιμότητας των ανώριμων αυγών νηματωδών θα πρέπει να μελετηθεί σε έναν υγρό θάλαμο (πιάτα Petri), τοποθετώντας τα αυγά ascaris σε διάλυμα φορμαλίνης 3% παρασκευασμένο σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε θερμοκρασία 24 - 30 ° C, αυγά μαστιγίου σε 3 % διάλυμα υδροχλωρικού οξέος σε θερμοκρασία 30 - 35 ° C. αυγά σκώληκα σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου στους 37 °C. Τα πιάτα Petri θα πρέπει να ανοίγουν 1 με 2 φορές την εβδομάδα για καλύτερο αερισμό και να υγραίνουμε ξανά το διηθητικό χαρτί με καθαρό νερό.

Οι παρατηρήσεις της ανάπτυξης αυγών ελμινθών πραγματοποιούνται τουλάχιστον 2 φορές την εβδομάδα. Η απουσία σημείων ανάπτυξης μέσα σε 2-3 μήνες υποδηλώνει τη μη βιωσιμότητά τους. Τα σημάδια της ανάπτυξης των αυγών ελμινθών είναι πρώτα τα στάδια σύνθλιψης, η διαίρεση του περιεχομένου του αυγού σε ξεχωριστά βλαστομερή. Τις πρώτες ημέρες, αναπτύσσονται έως και 16 βλαστομερή, τα οποία περνούν στο δεύτερο στάδιο - μόρουλας κ.λπ.

Τα αυγά αγκυλόστομων καλλιεργούνται σε γυάλινο κύλινδρο (50 cm ύψος και 7 cm διάμετρος) κλειστό με πώμα. Ένα μείγμα ίσων όγκων αποστειρωμένης άμμου, ξυλάνθρακα και περιττωμάτων με αυγά αγκυλόστομου, αραιωμένο με νερό σε ημι-υγρή σύσταση, χύνεται προσεκτικά στον πυθμένα του κυλίνδρου χρησιμοποιώντας έναν γυάλινο σωλήνα. Κατά τη διάρκεια 1 - 2 ημερών εγκατάστασής τους στο σκοτάδι σε θερμοκρασία 25 - 30 ° C, οι ραβδιτοειδείς προνύμφες εκκολάπτονται από τα αυγά και μετά από 5 - 7 ημέρες γίνονται ήδη νηματώδεις: οι προνύμφες σέρνονται στα τοιχώματα του κυλίνδρου, όπου είναι ορατά ακόμη και με γυμνό μάτι.

Τα αυγά τρηματωδών που αναπτύσσονται φυσικά στο νερό, όπως οπιστόρχες, διφυλλοβοθρίδες, φασιόλες και άλλα, τοποθετούνται σε ένα ποτήρι ρολογιού, σε ένα πιάτο Petri ή σε άλλο δοχείο και χύνεται ένα μικρό στρώμα συνηθισμένου νερού. Κατά την καλλιέργεια αυγών fasciola, θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι αναπτύσσονται πιο γρήγορα στο σκοτάδι, ενώ το miracidium σχηματίζεται σε ζωντανά αυγά σε θερμοκρασία 22–24 ° C μετά από 9–12 ημέρες. Όταν γίνεται μικροσκόπηση αναπτυσσόμενων ωαρίων τρηματωδών, οι κινήσεις του miracidium είναι καθαρά ορατές. Το Fasciola miracidium αναδύεται από τα κελύφη των αυγών μόνο στο φως.

Μέθοδος Fulleborn. Οι προνύμφες των αγκυλόστομων και των ισχυροειδών καλλιεργούνται σε άγαρ σε τρυβλίο Petri με ζωικό κάρβουνο. Αφού διατηρηθούν σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 25 - 30 ° C για 5 - 6 ώρες, οι προνύμφες απλώθηκαν πάνω από το άγαρ, αφήνοντας πίσω τους μια διαδρομή βακτηρίων.

Μέθοδος Harada και Mori. 7 ml απεσταγμένου νερού προστίθενται σε δοκιμαστικούς σωλήνες τοποθετημένους σε σχάρα. Πάρτε 0,5 g περιττωμάτων με ένα ξύλινο ραβδί και κάντε ένα επίχρισμα σε διηθητικό χαρτί (15 x 150 mm) 5 cm από το αριστερό άκρο (αυτή η λειτουργία πραγματοποιείται σε ένα φύλλο χαρτιού για να προστατεύσετε την επιφάνεια του εργαστηριακού τραπεζιού). Στη συνέχεια, η λωρίδα με το επίχρισμα εισάγεται στο σωληνάριο έτσι ώστε το αριστερό άκρο που είναι απαλλαγμένο από το επίχρισμα να φτάσει στο κάτω μέρος του σωλήνα. Καλύψτε το πάνω άκρο με ένα κομμάτι σελοφάν και τυλίξτε το σφιχτά με μια ελαστική ταινία. Στον δοκιμαστικό σωλήνα γράψτε τον αριθμό, το όνομα του ατόμου. Σε αυτή την κατάσταση, οι δοκιμαστικοί σωλήνες αποθηκεύονται για 8-10 ημέρες σε θερμοκρασία 28 °C. Για να μελετήσετε τις προνύμφες, αφαιρέστε και αφαιρέστε το κάλυμμα από σελοφάν και αφαιρέστε μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού με τσιμπιδάκια. Θα πρέπει να ληφθεί μέριμνα σε αυτή την περίπτωση, καθώς ένας μικρός αριθμός μολυσματικών προνυμφών μπορεί να μετακινηθεί στο πάνω άκρο του διηθητικού χαρτιού ή στο τοίχωμα του δοκιμαστικού σωλήνα και να διεισδύσει κάτω από την επιφάνεια του σελοφάν.

Οι σωλήνες τοποθετούνται σε λουτρό ζεστού νερού στους 50°C για 15 λεπτά, μετά τα οποία τα περιεχόμενα ανακινούνται και χύνονται γρήγορα σε σωλήνα καθίζησης προνυμφών 15 ml. Μετά τη φυγοκέντρηση, το υπερκείμενο αφαιρείται και το ίζημα μεταφέρεται σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, καλυμμένη με καλυπτρίδα και μικροσκόπιο υπό χαμηλή μεγέθυνση.

Για διαφορική διάγνωσηνηματώδεις προνύμφες, πρέπει να χρησιμοποιήσετε τα δεδομένα στον Πίνακα 3.

Πίνακας 3

ΔΙΑΦΟΡΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΑ ΦΙΛΑΡΙΩΜΕΝΩΝ ΠΡΟΝΥΜΦΩΝ A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, trICHOStrONGYLUS SP.

Προνύμφες	Διαστάσεις	Ιδιαίτερα χαρακτηριστικά
A. duodenale	Μήκος σώματος περίπου 660 μικρά, καπάκι - 720 nm	Η ραβδώσεις του καλύμματος είναι λιγότερο έντονη, η προεξοχή του στόματος είναι λιγότερο αισθητή, το πρόσθιο άκρο του σώματος (αλλά όχι το καπάκι) είναι αμβλύ, η διάμετρος του εντερικού σωλήνα είναι μικρότερη από τον οισοφαγικό βολβό, το ουραίο άκρο είναι αμβλύ
N. americanus	Μήκος σώματος περίπου 590 μm, καπάκι - 660 nm	Το έλυτρο είναι αισθητά ραβδωτό, ειδικά στο ουραίο μέρος του σώματος, το στόμα φαίνεται σκούρο, το πρόσθιο άκρο του σώματος (αλλά όχι η θήκη) είναι στρογγυλεμένο σαν στενό άκρο. αυγό κότας, το πρόσθιο τμήμα του εντερικού σωλήνα τέτοιας διαμέτρου όπως ο βολβός του οισοφάγου, το άκρο της ουράς είναι έντονα μυτερό
S. stercoralis	Μήκος σώματος περίπου 500 μm	Η προνύμφη χωρίς θήκη, ο οισοφάγος είναι περίπου το ήμισυ του μήκους του σώματος, η ουρά είναι αμβλεία ή διακλαδισμένη
Trichostrongylus sp.	Μήκος σώματος περίπου 750 μικρά	Ο αυλός του εντέρου δεν είναι ίσιος, αλλά ζιγκ-ζαγκ, το ουραίο άκρο είναι στρογγυλεμένο και έχει σχήμα κουμπιού

7.7.2. Μέθοδοι χρώσης αυγών και προνυμφών ελμινθών

Οι νεκροί ιστοί στις περισσότερες περιπτώσεις αντιλαμβάνονται τα χρώματα πιο γρήγορα από τους ζωντανούς. Αυτά τα χαρακτηριστικά χρησιμοποιούνται στην ελμινθολογία για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών και των προνυμφών των ελμινθών. Ωστόσο, σε ορισμένες περιπτώσεις, ορισμένα χρώματα γίνονται καλύτερα αντιληπτά από τους ζωντανούς ιστούς παρά από τους νεκρούς.

Για τον διαφορικό προσδιορισμό ζωντανών και νεκρών αυγών και προνυμφών, χρησιμοποιούνται οι ακόλουθες βαφές και μέθοδοι.

Η λευκοβάση του μπλε του μεθυλενίου χρησιμοποιείται συχνά για τη χρώση ζωντανών και νεκρών ιστών. Ένα ζωντανό κύτταρο ή ιστός μειώνει το μπλε του μεθυλενίου σε άχρωμη λευκοβάση· ο νεκρός ιστός δεν έχει αυτή την ικανότητα και επομένως αποκτά χρώμα.

Το κριτήριο για την κατάσταση του αυγού είναι η χρώση του εμβρύου, αλλά όχι το κέλυφος. Αυτή η ικανότητα σχετίζεται με τις συνθήκες θανάτου του αυγού. Σε εκείνες τις περιπτώσεις όπου το ινώδες κέλυφος στο νεκρό αυγό δεν χάνει τις ημιπερατές του ιδιότητες, δεν θα περάσει βαφές, επομένως, το νεκρό έμβρυο δεν θα λερωθεί. Ένα έγχρωμο έμβρυο δείχνει πάντα το θάνατο του αυγού.

Για το χρωματισμό των αυγών Ascaris, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μπλε του μεθυλενίου σε διάλυμα γαλακτικού οξέος με καυστικό αλκάλιο (μπλε του μεθυλενίου 0,05 g, καυστική σόδα 0,5 g, γαλακτικό οξύ - 15 ml). Τα ζωντανά αυγά δεν αντιλαμβάνονται το χρώμα. τα έμβρυα των νεκρών ωαρίων γίνονται μπλε. Οι προνύμφες Ascaris χρωματίζονται με ένα βασικό διάλυμα μπλε χρώματος μπριγιάν-κρεσυλίου σε συγκέντρωση 1:10.000 ως εξής: μια σταγόνα υγρού με αυγά ascaris και μια σταγόνα από το βασικό διάλυμα βαφής εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα. Το παρασκεύασμα καλύπτεται με καλυπτρίδα, η οποία πιέζεται σφιχτά πάνω στη γυάλινη πλάκα με ελαφρύ χτύπημα με βελόνα ανατομής. Στο μικροσκόπιο, παρατηρείται ο αριθμός των εκκολαφθέντων προνυμφών και ο βαθμός χρώσης τους. μετά από την οποία το ίδιο φάρμακο επανεξετάζεται μετά από 2 έως 3 ώρες. Μόνο μη παραμορφωμένες προνύμφες που δεν έχουν χρωματιστεί για 2 ώρες θεωρούνται ζωντανές. Οι νεκρές προνύμφες είτε δεν αναδύονται από τα αυγά, είτε λερώνονται όταν σπάσει το κέλυφος (μερικώς ή πλήρως).

Κατά τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών των πτηνών ascaridia, είναι δυνατή η χρώση των παρασκευασμάτων με 5% διάλυμα αλκοόληςιώδιο. Όταν εφαρμόζεται στο φάρμακο, τα έμβρυα νεκρών αυγών ασκαριδών για 1 - 3 δευτερόλεπτα. είναι βαμμένα πορτοκαλί.

Νεκρά αυγά οπίσθορχης και ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών χρωματίζονται με διάλυμα κυανού τολουιδίνης (1:1000) και νεκρές ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών χρωματίζονται με διάλυμα μπλε κρεζυλίου (1:10000). Ταυτόχρονα, τα έμβρυα και το κέλυφος τόσο των νεκρών όσο και των ζωντανών αυγών αποκτούν χρώμα. Επομένως, μετά τη χρώση, τα αυγά και οι ογκόσφαιρες πλένονται καθαρό νερόκαι επιπλέον τα βάφουμε με σαφρανίνη (σε αραίωση 1:10.000 αλκοόλης 10 ° C). Το αλκοόλ αφαιρεί τη βαφή από τα κελύφη και η σαφρανίνη κηλιδώνει κόκκινο. Ως αποτέλεσμα, τα ζωντανά αυγά γίνονται κόκκινα. αυγά με νεκρά έμβρυα - σε μπλε, και το κέλυφος παραμένει κόκκινο. Νεκρά έμβρυα ογκόσφαιρων βοοειδούς ταινίας γρήγορα, μέσα σε λίγα λεπτά, χρωματίζονται έντονο κόκκινο ή ροζ με σαφρανίνη ή μπλε με μπλε κρεζυλίου σε αραίωση 1:4000 ή με καρμίνη indigo σε αραίωση 1:1000 - 1 :2000. Τα ζωντανά έμβρυα δεν αλλάζουν υπό την επίδραση αυτών των χρωμάτων ακόμη και μετά από 2 - 7 ώρες.

Για να προσδιορίσετε τη βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας πυγμαίου, συνιστάται η χρήση των ακόλουθων χρωμάτων:

1. Γυαλιστερό κρεασυλικό μπλε (1:8000) - μετά από 1 ώρα, η ογκόσφαιρα των νεκρών αυγών λερώνεται ιδιαίτερα έντονα, η οποία ξεχωρίζει έντονα στο χλωμό ή άχρωμο φόντο του υπόλοιπου αυγού.

2. Safranin (1:8000 για 2 ώρες και 1:5000 για 3 έως 5 ώρες).

3. Διάλυμα 50% πυρογαλικού οξέος σε αραίωση 1:2 ​​- όταν εκτίθεται για 1 ώρα σε θερμοκρασία 29 - 30 ° C (όσο χαμηλότερη είναι η θερμοκρασία, τόσο μεγαλύτερη είναι η διαδικασία χρώσης).

7.7.3. Μέθοδος φωταύγειας για τη μελέτη αυγών και προνυμφών ελμινθών

Το μικροσκόπιο φθορισμού καθιστά δυνατή τη διαφοροποίηση ζωντανών και νεκρών αντικειμένων χωρίς να καταστρέφεται το αυγό. Για τον φθορισμό, δεν χρησιμοποιούνται υπεριώδεις ακτίνες, αλλά το μπλε-ιώδες τμήμα του ορατού φωτός, με συμβατικό μικροσκόπιο και γυάλινες πλάκες. ένα ειδικό σετ έγχρωμων φίλτρων προστίθεται στο φωτιστικό OI-18.

Ζωντανά και νεκρά αυγά στρογγυλών σκουληκιών, σκουληκιών καρφίτσας, πυγμαίων ταινιών, βοοειδών, ταινίας και άλλων ελμινθών φωτίζουν διαφορετικά. Αυτό το φαινόμενο παρατηρείται τόσο κατά τη διάρκεια της πρωτογενούς φωταύγειας χωρίς τη χρήση χρωστικών, όσο και όταν χρωματίζεται με φθοριόχρωμα (ακριδίνη πορτοκαλί, κοριφωσφίνη, πριμουλίνη, αουρολίνη, θειική βερλερίνη, τριφλαβίνη, ριβανόλη, κινακρίνη κ.λπ.).

Τα μη λεκιασμένα, ζωντανά αυγά στρογγυλών σκουληκιών, χωρίς τμήματα, λάμπουν έντονο πράσινο με κιτρινωπή απόχρωση. Στα νεκρά αυγά, το κέλυφος εκπέμπει πράσινο φως πολύ πιο φωτεινό από το σκούρο πράσινο εμβρυϊκό τμήμα. στα αυγά στρογγυλών σκουληκιών με προνύμφη εμφανίζεται μόνο το κέλυφος, ενώ στα νεκρά τόσο το κέλυφος όσο και η προνύμφη είναι έντονο κίτρινο.

Ζωντανά αυγά ακίδων και νάνων ταινιών που δεν έχουν χρωματιστεί και δεν είναι τμηματικά εκπέμπουν ένα πρασινωπό-κίτρινο φως· στα νεκρά αυγά, το κέλυφος φωτίζει έντονα στο φόντο μιας σκούρα πράσινης εμβρυϊκής μάζας.

Με δευτερογενή φωταύγεια (κατά τη χρώση πορτοκαλί ακριδίνης σε αραίωση 1:10000 και 1:50000 από 30 λεπτά έως 2 ώρες), το κέλυφος των ζωντανών και νεκρών νηματωδών, τρεματωδών και κεστωδών φωτίζει διαφορετικά.

Το κέλυφος των ζωντανών και νεκρών αυγών των ασκαριδών, τοξόκαρ, των σκουληκιών καρφίτσας, των πυγμαίων ταινιών, της ταινίας αρουραίων, της ταινίας των ταύρων, των ταυροσκώληκων γίνεται πορτοκαλοκόκκινο. Έμβρυα ζωντανών αυγών ασκαρίδας, τοξασκάρης, ταινίας αρουραίου, πλατιάς ταινίας και ογκόσφαιρας ταινίας βοοειδών φωτοβολούν σε θαμπό σκούρο πράσινο ή γκριζοπράσινο χρώμα. Τα νεκρά έμβρυα των αυγών αυτών των ελμινθών εκπέμπουν ένα "φλεγόμενο" πορτοκαλοκόκκινο χρώμα. Οι ζωντανές προνύμφες και τα τοξόκαρα (κέλυφος αυγών) εκπέμπουν ένα θαμπό γκριζοπράσινο φως, όταν πεθαίνουν, το χρώμα αλλάζει από το άκρο του κεφαλιού σε ένα "φλεγόμενο" ανοιχτό πράσινο, μετά σε κίτρινο, πορτοκαλί και τέλος σε έντονο πορτοκαλί.

Όταν βάφονται με φθορόχρωμα - coryphosphyllum, primulin, νεκρά αυγά ascarids και whipworms δείχνουν μια λάμψη από λιλά-κίτρινο έως χαλκό-κόκκινο. Τα βιώσιμα αυγά δεν φωτίζουν, αλλά γίνονται σκούρα πράσινα.

Τα ζωντανά αυγά τρεματωδών (Paragonimus και Clonorchis) δεν φωτίζουν μετά τη χρώση με πορτοκαλί ακριδίνης και ένα κιτρινοπράσινο χρώμα προέρχεται από τα νεκρά αυγά.

Η μέθοδος φωταύγειας μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των προνυμφών ελμινθών. Έτσι, φθοροχρωματισμένες με διάλυμα ακριδίνης πορτοκαλί (1:2000) προνύμφες στρογγυλικού, λάμψη rhabdita: ζωντανό - πράσινο (με απόχρωση), νεκρό - φωτεινό πορτοκαλί φως.

Τα ζωντανά miracidia που έχουν αναδυθεί από το κέλυφος εκπέμπουν ένα αμυδρό γαλαζωπό φως με μια ελάχιστα αισθητή ανοιχτό κίτρινη στεφάνη από βλεφαρίδες, αλλά 10-15 λεπτά μετά το θάνατο εμφανίζονται ως ένα έντονο "φλεγόμενο" ανοιχτό πράσινο, και στη συνέχεια πορτοκαλοκόκκινο φως.

7.7.4. μέθοδος βιολογικής ανάλυσης

Για παράδειγμα, για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των αυγών ascaris (χοιροί ascaris, άνθρωποι, toxocara, toxascaris κ.λπ.) ανά ζώο (ινδικά χοιρίδια, ποντίκια), χρειάζονται τουλάχιστον 100 - 300 αυγά με ανεπτυγμένη προνύμφη. Τα αυγά Ascaris σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου διοχετεύονται με πιπέτα μέσω του στόματος ενός ποντικιού ή ενός ινδικού χοιριδίου. Μετά από 6-7 ημέρες, το ζώο σφάζεται, ανοίγεται και το συκώτι και οι πνεύμονές του εξετάζονται χωριστά για την παρουσία προνυμφών ascaris. Για να γίνει αυτό, το συκώτι και οι πνεύμονες κόβονται σε μικρά κομμάτια με ψαλίδι και εξετάζονται σύμφωνα με τη μέθοδο Berman ή Supryaga (ενότητα 6.1.2).

Εάν τα ζώα είχαν μολυνθεί με ζωντανά επεμβατικά αυγά, τότε σε αυτοψία στο ήπαρ και τους πνεύμονες, εντοπίζονται μεταναστευτικές προνύμφες ασκαρίδων.

Σε περίπτωση μόλυνσης, τα αυγά Fasciola στα κόπρανα των εργαστηριακών ζώων μπορούν να ανιχνευθούν σε κουνέλια μετά από 2 μήνες, σε ινδικά χοιρίδια- μετά από 50 ημέρες, σε ποντίκια - μετά από 35 - 40 ημέρες.

Για ταχύτερη απόκριση, τα πειραματόζωα ανοίγουν μετά από 20-30 ημέρες και το ήπαρ εξετάζεται για την παρουσία νεαρών φασιόλων.

Για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας πυγμαίου, συνιστάται επίσης η τροφοδοσία τους σε λευκά ποντίκια που δεν είχαν μολυνθεί προηγουμένως, ακολουθούμενη από αυτοψία των ζώων μετά από 92-96 ώρες και ανίχνευση κυστικεροειδών στις εντερικές λάχνες ή κεστόδων στον εντερικό αυλό.

Για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών opisthorchis, συνιστάται μια μέθοδος (German S.M., Beer S.A., 1984), που βασίζεται στη φυσικοχημική ενεργοποίηση του αδένα εκκόλαψης miracidium και στη διέγερση της κινητικής δραστηριότητας της προνύμφης, η οποία οδηγεί στο άνοιγμα του αυγού. καπάκι και την ενεργή απελευθέρωση του miracidium σε πειραματικές συνθήκες.

Ένα εναιώρημα αυγών opisthorchis σε νερό προψύχεται στους 10 - 12 ° C (όλες οι επόμενες εργασίες πραγματοποιούνται σε θερμοκρασία δωματίου 19 - 20 ° C). 1 σταγόνα ενός εναιωρήματος που περιέχει 100-150 αυγά προστίθεται σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης. Ο δοκιμαστικός σωλήνας τοποθετείται σε τρίποδο για 5-10 λεπτά. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, όλα τα αυγά έχουν χρόνο να βυθιστούν στον πάτο. Στη συνέχεια, με μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού, αναρροφάται προσεκτικά η περίσσεια νερού και προστίθενται 2 σταγόνες ειδικού μέσου στον δοκιμαστικό σωλήνα. Το μέσο παρασκευάζεται σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl 0,005 Μ. Διάλυμα αιθανόλης 12 - 13% και βαφή (ματζέντα, σαφρανίνη, ηωσίνη, μπλε του μεθυλενίου, κ.λπ.) προστίθενται στο ρυθμιστικό. Ο δοκιμαστικός σωλήνας ανακινείται, το περιεχόμενό του μεταφέρεται με μια πιπέτα σε μια γυάλινη πλάκα και αφήνεται για 10 λεπτά ανακινώντας ελαφρά. Στη συνέχεια προσθέστε 2 σταγόνες από το υποδεικνυόμενο μέσο. Το παρασκεύασμα είναι έτοιμο για μικροσκόπηση κάτω από ένα συμβατικό μικροσκόπιο φωτός σε μεγέθυνση 20x.

Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, το καπάκι των βιώσιμων προνυμφών ανοίγει και το miracidium εισέρχεται ενεργά στο υποδεικνυόμενο μέσο. Λόγω της παρουσίας αιθανόλης σε αυτό, ακινητοποιούνται μετά από 2-5 λεπτά και μετά βάφονται με βαφή. Μπορούν εύκολα να ανιχνευθούν και να μετρηθούν στο μικροσκόπιο.

Αρχικό επίπεδο γνώσεων και δεξιοτήτων.

Ο μαθητής πρέπει να γνωρίζει:

1. Εκπρόσωποι των trematodes opisthorch, paragonim, fasciola, dicrocelia.

2. Κύκλοι ζωής, τρόποι μόλυνσης των τρεματωδών, κλινική εικόναασθένειες, κόπρανα διάρκεια ζωής

Ο μαθητής πρέπει να είναι σε θέση:

1. Προσδιορίστε τα αυγά τρηματωδών από σχήματα, πίνακες.

2. Σχηματίστε προληπτικά μέτρα.

3. Ετοιμάστε ένα εγγενές επίχρισμα, ένα μεγάλο επίχρισμα, ένα επίχρισμα Κάτω, αξιολογήστε την εργασία σας, δουλέψτε με μικροσκόπιο.

4. Προσδιορίστε τα αυγά των τρεματωδών σε παρασκευάσματα, συμμορφώνονται με τους κανόνες προστασίας της εργασίας, συμμορφώνονται με τους κανόνες του san.-epid. τρόπος.

Δομή μαθήματος:

Θεωρητικό μέρος:

Ø Μικροδιάλεξη.

Πρακτικό μέρος:

Ø Παρασκευή αυτοφυούς επιχρίσματος, μεγάλου επιχρίσματος, Κάτω επίχρισμα, αξιολόγηση απόδοσης, μικροσκοπία

Μικροδιάλεξη.

Συλλογή και παράδοση υλικού

Η τελική διάγνωση των ελμινθασών μπορεί να καθοριστεί μόνο με βάση τα αποτελέσματα εργαστηριακή έρευνα. κύρια μέθοδος εργαστηριακή διάγνωσηΗ ελμινθίαση είναι η ανίχνευση αυγών ή προνυμφών ελμινθών σε κόπρανα, ούρα, αίμα και άλλα βιολογικά υγρά κατά τη μικροσκοπική εξέταση. Υλικά για έρευνα είναι περιττώματα, περιεχόμενο δωδεκαδάκτυλο, αίμα, πτύελα, βιοψία ιστών και άλλα υλικά.

Η συλλογή του υλικού για έρευνα πραγματοποιείται σε καθαρά γυάλινα ή πλαστικά πιάτα, τα οποία συνοδεύονται από παραπομπή στην οποία αναγράφεται το πλήρες όνομα του υποκειμένου. Κατά τη διάρκεια μιας μαζικής εξέτασης, επιτρέπεται η συλλογή περιττωμάτων σε κερωμένα χάρτινα κύπελλα, πλαστικές σακούλες.

Τα κόπρανα για ανάλυση θα πρέπει να παραδίδονται στο εργαστήριο το αργότερο μία ημέρα και εάν υπάρχει υποψία ισχυροειδίασης, αμέσως μετά την απομόνωσή τους. Εάν παραβιαστεί αυτός ο κανόνας, η διάγνωση σε σχέση με την καταστροφή αυγών ή προνυμφών γίνεται συχνά δύσκολη ή αδύνατη.

Για τον εντοπισμό αυγών και προνυμφών ορισμένων τύπων ελμινθών, χρησιμοποιούνται ειδικές μέθοδοι: η μέθοδος Bormann, η περιπρωκτική απόξεση, η μέθοδος επιχρίσματος με χρήση κολλητικής ταινίας, η καλλιέργεια προνυμφών σε διηθητικό χαρτί (μέθοδος Harada και Mori) κ.λπ.

Πρακτικό μέρος:

Οι πιο συνηθισμένες μέθοδοι για την εξέταση των κοπράνων για την παρουσία αυγών ελμινθών είναι οι μέθοδοι της αυτοφυούς επάλειψης, της παχύρρευστης επίχρισης κάτω από σελοφάν και της μεγάλης επίχρισης.

Κατά τη μελέτη των αυγών ελμινθών κάτω από μικροσκόπιο, συνιστάται η σύγκριση ορατή εικόναμε τα χαρακτηριστικά του στον καθοριστικό παράγοντα των αυγών ελμινθών.

Μητρική μέθοδος επιχρίσματος

Εξοπλισμός:

γυάλινες τσουλήθρες?

φαρδιά κυβέτα?

πλαστικά μπαστούνια?

μολύβι;

50% υδατικό διάλυμα γλυκερίνης (αναμείξτε ίσα μέρη γλυκερίνης και απεσταγμένου νερού).

ένα δοχείο με διάλυμα polydez 0,5%.

μικροσκόπιο.

Πρόοδος

1. Τοποθετήστε τις διαφάνειες σε μια κυβέτα, αριθμήστε τις διαφάνειες.

2. Απλώστε με μια πιπέτα 2 σταγόνες υδατικού διαλύματος γλυκερίνης 50% σε απόσταση 4 cm η μία από την άλλη σε γυάλινες πλάκες.

3. Πάρτε ένα κομμάτι περιττωμάτων με ένα ραβδί, σε μέγεθος κεφαλής σπίρτου (30-50 mg), προσθέστε το σε μια σταγόνα γλυκερίνης και αλέστε μέχρι να γίνει ομοιόμορφο εναιώρημα.

4. Σε κάθε ποτήρι παρασκευάζονται δύο αυτοφυή επιχρίσματα, τα οποία δεν πρέπει να συγχωνεύονται μεταξύ τους και να μην φτάνουν στις άκρες για να μη λερωθούν τα δάχτυλα του εργαστηρίου. Για κάθε δείγμα χρησιμοποιούνται νέα ραβδιά.

5. Χωρίς να καλύψετε τα σκευάσματα με καλυπτρίδες, εξετάστε στο μικροσκόπιο (αντικείμενο 8x, προσοφθάλμιος φακός 10-15x).

6. Στο τέλος της μελέτης, βυθίστε τα σκευάσματα σε δοχείο με διάλυμα πολυντέζ 0,5%.

Μέθοδος παχύρρευστης επάλειψης κάτω από σελοφάν.

Η μέθοδος προτάθηκε από τους K. Kato, M. Miur το 1954. Ένα επίχρισμα είναι ένα στρώμα από μη αραιωμένα κόπρανα σε μια γυάλινη πλάκα, πιεσμένο κάτω από ένα φύλλο λεπτού υγροσκοπικού σελοφάν εμποτισμένου με γλυκερίνη.

Ρύζι. Προετοιμασία παχύρρευστου λεκέ κάτω από σελοφάν:

α - εγγενές επίχρισμα? β - πιέζοντας ένα κομμάτι περιττωμάτων καλυμμένο με σελοφάν με ένα ελαστικό πώμα. γ - ένα παχύ επίχρισμα κάτω από σελοφάν (σύμφωνα με τους Yu.A. Berezantsev και E.G. Avtushenko, 1976)

Εξοπλισμός:

φαρδιά κυβέτα?

λωρίδες σελοφάν 22x30 mm επεξεργασμένες με μείγμα Kato για 24 ώρες.

Μίγμα Kato (διάλυμα πράσινου μαλαχίτη 3% -6 ml, διάλυμα φαινόλης 6% - 500 ml, γλυκερίνη - 500 ml, 3,5 ml του μείγματος είναι αρκετά για 100 λωρίδες).

μεγάλα ελαστικά πώματα.

ανατομικά τσιμπιδάκια?

πλαστικά μπαστούνια?

μολύβι;

μικροσκόπιο.

Πρόοδος

1. Τοποθετήστε τις διαφάνειες σε μια κυβέτα, αριθμήστε τις διαφάνειες.

2. Μαζέψτε τα κόπρανα σε μέγεθος μισού μπιζελιού (50-60 mg) με ένα ραβδί και τοποθετήστε σε μια γυάλινη τσουλήθρα στο κέντρο.

3. Αφαιρέστε την επεξεργασμένη με Kato λωρίδα σελοφάν από το βάζο με τσιμπιδάκια και τοποθετήστε την σε ένα δείγμα σκαμνιού σε μια γυάλινη πλάκα.

4. Πιέστε προς τα κάτω το σελοφάν με ένα ελαστικό πώμα, έτσι ώστε τα κόπρανα να κατανέμονται ομοιόμορφα, χωρίς να ρέουν πέρα ​​από τις άκρες της ταινίας.

5. Αφήστε το παρασκεύασμα μέχρι να διαφανεί για 60 λεπτά και στη συνέχεια εξετάστε το στο μικροσκόπιο (αντικείμενο 8-40x, προσοφθάλμιος φακός 10x).

6. Στο τέλος της μελέτης, το φάρμακο χαμηλώνεται σε δοχείο με διάλυμα polydez 0,5%.

7. Αφαιρέστε ΧΩΡΟΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ, Πλύνετε τα χέρια.

Μέθοδος μεγάλης επίχρισης.

Η μέθοδος προτάθηκε από τον Yu.A. Berezantsev και E.G. Avtushenko το 1973. Η ουσία της μεθόδου βασίζεται στη χρήση διόφθαλμου μικροσκοπίου και ενός εγγενούς επιχρίσματος σε γυαλί 6x9 cm, το οποίο επιτρέπει σε κάποιον να εξετάσει ταυτόχρονα έως και 200-300 mg περιττωμάτων.

Εξοπλισμός:

γυάλινες διαφάνειες 6x9 cm και 7x10 cm.

πλαστικά μπαστούνια?

Διάλυμα γλυκερίνης 50% (γλυκερίνη και απεσταγμένο νερό σε ίσα μέρη).

ένα δοχείο με διάλυμα polydez 0,5%.

μικροσκόπιο;

εμαγιέ κυβέτα?

μολύβι.

Πρόοδος

1. Τοποθετήστε διαφάνειες 7x10 cm σε κυβέτα, αριθμήστε τις διαφάνειες.

2. Στη συνέχεια, τοποθετήστε μια δεύτερη διαφάνεια 6x9 cm σε κάθε διαφάνεια.

3. Ρίξτε με σιφώνιο 15-20 σταγόνες διαλύματος γλυκερίνης 50% σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα 6x9 cm.

4. Βγάλε ένα ξυλάκι έξω διαφορετικούς τόπουςκομμάτια περιττωμάτων μεγέθους ενός μέσου μπιζελιού (200-300 mg) και χαμηλώστε τα σε ένα διάλυμα 50% γλυκερίνης σε μια γυάλινη πλάκα.

5. Τρίψτε ένα κομμάτι περιττωμάτων σε γλυκερίνη με ένα ξυλάκι μέχρι να αιωρηθεί ομοιόμορφα έτσι ώστε η περιοχή που καταλαμβάνει να είναι περίπου 33-34 cm 2. Μην καλύπτετε το επίχρισμα με καλυπτρίδες.

6. Σηκώστε ένα μεγάλο κάλυμμα 7x10 εκ. από τις άκρες, μαζί με τη μεγάλη μουτζούρα πάνω του (για να μην λερωθούν τα δάχτυλά σας).

7. Εξετάστε ένα μεγάλο επίχρισμα σε μεγέθυνση 34x (αντικείμενο 2x, προσοφθάλμιος φακός 17x) και 50x (αντικείμενο 4x, προσοφθάλμιος φακός 12,5x). Σε αμφίβολες περιπτώσεις, οι μελέτες γίνονται σε μεγάλη μεγέθυνση.

8. Στο τέλος της μελέτης, το φάρμακο χαμηλώνεται σε δοχείο με διάλυμα polydez 0,5%.

9. Καθαρίστε το χώρο εργασίας, πλύνετε τα χέρια σας.

Με αυτή τη μέθοδο έρευνας προσδιορίζονται μεγάλα αυγά ελμίνθων (στρογγυλός σκώληκας, μαστίγιος, αγκυλόστομος, καρφίτσα, φαρδιά ταινία, teniid, fascioli). Φαίνονται λίγο διαφορετικά και επομένως χρειάζεται κάποια εμπειρία για να τα εντοπίσετε γρήγορα. Μεγάλα επιχρίσματα μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον έλεγχο για σχιστοσωμικά αυγά και προνύμφες ακμής. Ένα μεγάλο επίχρισμα περιέχει 6-10 φορές περισσότερο υλικό δοκιμής από ένα εγγενές επίχρισμα. Η αποτελεσματικότητά του είναι πολύ μεγαλύτερη.

Παρόμοιες πληροφορίες.

Υλικό για έρευνα: κόπρανα, ούρα, περιεχόμενο δωδεκαδακτύλου, πτύελα, αίμα, δέρμα, περιπρωκτικός δενδρίτης, μυϊκός ιστός.

Οι μικροσκοπικές μέθοδοι έρευνας βασίζονται στην ανίχνευση αυγών και προνυμφών ελμινθών. Ανάλογα με τους στόχους της μελέτης διακρίνονται σε ποιοτικούς και ποσοτικούς.

1. Μέθοδος παχύρρευστης επίχρισης κατά Κάτω.Η αρχή της μεθόδου είναι ότι τα αυγά ελμινθών βρίσκονται σε ένα παχύ επίχρισμα περιττωμάτων, διαυγασμένα με γλυκερίνη και βαμμένα με πράσινο μαλαχίτη. Η μέθοδος είναι πιο αποτελεσματική για την ασκαρίαση, την τριχουρίαση, τη διφυλλοβοθρίαση, την τενιίδωση και, σε μικρότερο βαθμό, για την αγκυλοστομίαση και την νάνο ταινία.

3. Μέθοδος εμπλουτισμού(Kofoid - Barbera) βασίζεται στην αρχή των αυγών που επιπλέουν σε κορεσμένο διάλυμα επιτραπέζιο αλάτι. Μπορείτε να βρείτε αυγά τρεματωδών, πλατιά ταινία, ογκόσφαιρα, ταενίδια, μη γονιμοποιημένα αυγά στρογγυλών σκουληκιών.

4. Μέθοδος Kalantaryan- η αρχή είναι η ίδια όπως στην προηγούμενη, αλλά ως διάλυμα επίπλευσης χρησιμοποιείται ένα κορεσμένο διάλυμα νιτρικού αζώτου.

5. Υπάρχει ειδικές μεθόδουςεξέταση κοπράνων για παρουσία απονευρωσίτιδας, στρογγυλοειδίασης, αγκυλοστομίασης.

6. Προπρωκτική και περιπρωκτική-ορθική μέθοδοςδιάγνωση εντεροβίασης. Η απόξεση γίνεται το πρωί (πριν την τουαλέτα και τις κενώσεις του εντέρου) ή το βράδυ κατά τη διάρκεια του ύπνου.

Είναι πολύ σημαντικό να γνωρίζουμε

Απλές Μέθοδοι

μακροσκοπική μέθοδο. Κατά την εξέταση των κοπράνων, μπορεί κανείς να εντοπίσει έλμινθους, τα κεφάλια τους, τμήματα, θραύσματα στροβιλίων, τα οποία ξεχωρίζουν μόνα τους ή μετά την αποπαρασίτωση. Αυτή η μέθοδος συνιστάται ιδιαίτερα για την ανίχνευση της εντεροβίασης, της ταενίασης και της ταενιάρχωσης.

Μικρές μερίδες περιττωμάτων αναμειγνύονται με νερό σε ένα επίπεδο λουτρό ή σε ένα πιάτο Petri και, κοιτάζοντας σε καλό φως σε σκούρο φόντο, χρησιμοποιώντας μεγεθυντικό φακό εάν χρειάζεται, αφαιρέστε τους έλμινθους και όλους τους ύποπτους λευκούς σχηματισμούς με τσιμπιδάκια ή πιπέτα. Το υλικό που συλλέγεται μεταφέρεται σε ένα άλλο φλιτζάνι με νερό ή σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα αραιωμένης γλυκερίνης ή ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου για περαιτέρω μελέτη.

Με τη μέθοδο καθίζησης, ολόκληρο το τμήμα δοκιμής των κοπράνων θα πρέπει να αναμιγνύεται με νερό σε έναν γυάλινο κύλινδρο και, στη συνέχεια, το ανώτερο στρώμα νερού πρέπει να αποστραγγίζεται προσεκτικά. Αυτό επαναλαμβάνεται αρκετές φορές. Όταν το υγρό γίνει διαφανές, αποστραγγίζεται και το ίζημα παρατηρείται σε μικρές μερίδες σε γυάλινο λουτρό ή τρυβλίο Petri, όπως υποδεικνύεται παραπάνω.

Οι μικροσκοπικές μέθοδοι είναι η κύρια μέθοδος εξέτασης των κοπράνων για την ανίχνευση αυγών ή προνυμφών ελμινθών. Διάφορες Μέθοδοιοι μελέτες περιγράφονται παρακάτω. Προκειμένου να αυξηθεί η αξιοπιστία της εξέτασης, οι αναλύσεις μπορούν να επαναλαμβάνονται πολλές φορές την ημέρα ή με μεσοδιάστημα 1-3 ημερών.

Μητρική μέθοδος επιχρίσματος. Το εγγενές επίχρισμα είναι η πιο κοινή και τεχνικά διαθέσιμη μέθοδος για την εξέταση των κοπράνων. Σε ένα εγγενές επίχρισμα, μπορούν να βρεθούν αυγά και προνύμφες ελμινθών όλων των ειδών. Ωστόσο, με μικρό αριθμό αυγών στα κόπρανα, δεν βρίσκονται πάντα. Επομένως, η μελέτη των περιττωμάτων μόνο με τη βοήθεια ενός εγγενούς επιχρίσματος δεν είναι πλήρης και θα πρέπει να συμπληρωθεί με μεθόδους εμπλουτισμού. Η αποτελεσματικότητα της εξέτασης του εγγενούς επιχρίσματος βελτιώνεται σημαντικά κατά την προβολή τεσσάρων παρασκευασμάτων που παρασκευάζονται από δείγμα κοπράνων σε δύο γυάλινες πλάκες χωρίς καλυπτρίδες, κάτι που επιτρέπει την εξέταση συνολικά περίπου της ίδιας ποσότητας κοπράνων με τη μέθοδο Kato (βλ. παρακάτω).

Μια μικρή ποσότητα (μέγεθος ενός κεφαλιού σπίρτου) αναδευόμενων κοπράνων αλείφεται αραιά με ένα ξύλινο ραβδί στην επιφάνεια μιας γυάλινης πλάκας σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50%. Συνήθως παρασκευάζονται δύο επιχρίσματα σε ένα ποτήρι. Το επίχρισμα παρατηρείται κάτω από μικροσκόπιο χαμηλής μεγέθυνσης (ob. 8, app. 7). Σε αμφίβολες περιπτώσεις καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται υπό υψηλή μεγέθυνση (ob. 40).

Για να παρασκευαστεί ένα μεγάλο φυσικό επίχρισμα, 200-300 mg περιττωμάτων (το μέγεθος ενός μεγάλου μπιζελιού) αλέθονται σε ένα ποτήρι 6x9 cm σε 15-20 σταγόνες υδατικού διαλύματος γλυκερίνης 50%. Προβολή κάτω από διόφθαλμο στερεοσκοπικό μικροσκόπιο (τόμος 4, περ. 12,5 ή τόμος 2, περ. 17) σε εκπεμπόμενο φως χωρίς ολισθήσεις καλύμματος. Σε αμφίβολες περιπτώσεις, μπορείτε να μεταφράσετε τον φακό σε μεγαλύτερη μεγέθυνση. Σε τέτοια επιχρίσματα, τα χρωματιστά μεγάλα αυγά ελμινθών είναι σαφώς ορατά και τα διαφανή αυγά του πυγμαίου ταινίας είναι κάπως χειρότερα. Αυτή η μέθοδος δεν είναι κατάλληλη για την ανίχνευση μικρών αυγών. Ταυτόχρονα, ένας μεγάλος όγκος του μελετημένου υλικού και ένα μεγάλο οπτικό πεδίο με μεγάλο βάθος πεδίου παρέχουν σημαντική αποτελεσματικότητα αυτής της τροποποίησης σε σύγκριση με ένα συμβατικό αυτοφυές επίχρισμα.

Το παχύρρευστο επίχρισμα από σελοφάν (μέθοδος Kato) είναι πιο αποτελεσματικό από το εγγενές επίχρισμα, αλλά χρειάζεται και συνδυασμός με μεθόδους εμπλουτισμού. Ανιχνεύονται ωάρια όλων των τύπων ελμινθών, ωστόσο, για να ανιχνευθούν αυγά πυγμαίου ταινίας (διαφανή αυγά) ή οπίσθορχης (μικρά αυγά), ο εργαστηριακός θα πρέπει να είναι ιδιαίτερα προσεκτικός να μην τα παραλείψει (Εικ. 21).

Η μέθοδος βασίζεται στην ανίχνευση αυγών ελμίνθου σε ένα παχύ επίχρισμα κοπράνων, διαυγασμένο με γλυκερίνη και χρωματισμένο με πράσινο μαλαχίτη. Το υδρόφιλο σελοφάν κόβεται προκαταρκτικά σε πλάκες 20 x 40 mm και βυθίζεται σε ένα μίγμα Kato (6 ml υδατικού διαλύματος πράσινου μαλαχίτη 3%, 500 ml γλυκερόλης, 500 ml διαλύματος φαινόλης 6%). 3-5 ml από το μείγμα είναι αρκετά για 100 πιάτα, τα οποία είναι έτοιμα για χρήση σε μια μέρα και μπορούν να αποθηκευτούν στο ίδιο μείγμα σε καλά κλεισμένο δοχείο σε θερμοκρασία δωματίου για 6 μήνες. Ελλείψει πράσινου μαλαχίτη (συνιστάται για τη μείωση της κόπωσης των ματιών του βοηθού εργαστηρίου) και φαινόλης ( απολυμαντικό) μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μόνο ένα 50% υδατικό διάλυμα γλυκερίνης, η αποτελεσματικότητα της μελέτης δεν μειώνεται.

Ρύζι. 20. Μέθοδος παρασκευής παχύρρευστης επάλειψης κοπράνων με σελοφάν κατά Κάτω

100 mg περιττωμάτων εφαρμόζονται σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, καλυμμένη με μια πλάκα σελοφάν που έχει υποστεί επεξεργασία όπως παραπάνω και πιέζεται προς τα κάτω με ένα ελαστικό πώμα έτσι ώστε τα περιττώματα να μην εξαπλώνονται κάτω από το σελοφάν. Η μικροσκόπηση σε χαμηλή ή υψηλή μεγέθυνση του μικροσκοπίου πραγματοποιείται το αργότερο 1 ώρα (σε ζεστό καιρό - 30-40 λεπτά) μετά την προετοιμασία του επιχρίσματος. Ο λόγος για την αδιαφάνεια του σκευάσματος μπορεί να είναι ένα παχύ στρώμα περιττωμάτων, κακή επεξεργασία της πλάκας στο μείγμα Kato, ανεπαρκής χρόνος έκθεσης του σκευάσματος κάτω από σελοφάν. Το παρατεταμένο καθάρισμα με γλυκερίνη και η υπερβολική ξήρανση του σκευάσματος δυσκολεύουν επίσης τον εντοπισμό των αυγών.

Μέθοδος συστροφής σύμφωνα με το S.S. Σούλμαν. Η μέθοδος προτάθηκε για την ανίχνευση προνυμφών ελμινθών στα κόπρανα, κυρίως Strongyloid. Εξετάζονται μόνο πρόσφατα εκκρινόμενα κόπρανα, 2-3 g από τα οποία μεταφέρονται σε γυάλινο βάζο, ανακατεύονται με γυάλινη ράβδο με κυκλικές κινήσεις με 3-5 φορές μεγαλύτερη ποσότητα φυσιολογικού ορού, χωρίς να αγγίζουν τα τοιχώματα του αγγείου. Αυγά και προνύμφες ελμινθών συσσωρεύονται στο κέντρο. Μετά την ανάμειξη, η σταγόνα στο τέλος του ραβδιού μεταφέρεται γρήγορα σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

μεθόδους εμπλουτισμού. Οι μέθοδοι εμπλουτισμού βασίζονται στη διαφορά στο ειδικό βάρος των αυγών και στο χρησιμοποιούμενο διάλυμα αλατιού, γεγονός που καθιστά δυνατή την ανίχνευση μικρής ποσότητας από αυτά. Εάν το ειδικό βάρος των αυγών είναι μεγαλύτερο από το ειδικό βάρος του υγρού, τότε τα αυγά συγκεντρώνονται στο ίζημα, το οποίο εξετάζεται με μικροσκόπιο. Αυτή η μέθοδος καθίζησης χρησιμοποιείται για αυγά τρηματωδών. Με υψηλότερο ειδικό βάρος του διαλύματος, τα αυγά επιπλέουν στην επιφάνεια του υγρού και στη συνέχεια εξετάζεται το φιλμ. Αυτές είναι μέθοδοι επίπλευσης (floating), είναι πιο αποτελεσματικές για την ανίχνευση αυγών αγκυλόστομων, μαστιγίων και πυγμαίων ταινιών.

μεθόδους επίπλευσης. Η μέθοδος Fulleborn βασίζεται στην επίπλευση αυγών ελμινθών σε κορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου, το οποίο έχει υψηλή σχετική πυκνότητα (1,2), που καθιστά δυνατή την ανίχνευση αυγών με μικρό αριθμό από αυτά. Η μέθοδος είναι πιο αποτελεσματική από τη μελέτη ενός εγγενούς επιχρίσματος, αν και είναι πιο δύσκολη. Τα πλεονεκτήματα της μεθόδου είναι η φθηνότητα και η διαθεσιμότητα. Συνιστάται ο συνδυασμός της μελέτης του εγγενούς επιχρίσματος και της μεθόδου Fülleborn.

Ένα κορεσμένο διάλυμα παρασκευάζεται διαλύοντας 400 g χλωριούχου νατρίου σε 1 λίτρο νερό ενώ βράζει. Η σχετική πυκνότητα του διαλύματος είναι 1,18-1,22. Το διάλυμα φυλάσσεται σε κλειστή φιάλη. Για ανάλυση, 2-3 g περιττωμάτων τοποθετούνται σε ένα βάζο με όγκο 30-50 ml και, ενώ ανακατεύετε με ένα ραβδί, ένα κορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου προστίθεται σχεδόν στην κορυφή. Μια λωρίδα χαρτιού αφαιρεί γρήγορα τα επιπλέοντα μεγάλα σωματίδια. Μετά από 45-60 λεπτά. καθιζάνοντας με ένα συρμάτινο βρόχο, αφαιρέστε την επιφανειακή μεμβράνη και μεταφέρετέ τη σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα υδατικού διαλύματος γλυκερίνης 50%. Αντί να αφαιρέσετε τη μεμβράνη με μια θηλιά, μπορείτε να προσθέσετε το διάλυμα στο βάζο στην κορυφή, καλύψτε με μια γυάλινη διαφάνεια, στην επιφάνεια της οποίας κολλάνε τα αυγά που επιπλέουν. Ετοιμάζονται αρκετές προετοιμασίες. Επιπλέον, 2-4 παρασκευάσματα παρατηρούνται από το ίζημα, συλλέγοντάς το με μια οφθαλμική πιπέτα σε 2 γυάλινες πλάκες. Εκτός από την επιφανειακή μεμβράνη, είναι επίσης απαραίτητο να εξεταστεί το ίζημα, καθώς τα αυγά των τρεματωδών, των taeniids, των μη γονιμοποιημένων αυγών του ascaris δεν επιπλέουν σε αυτό το διάλυμα. Τα αυγά ορισμένων ελμινθών δεν επιπλέουν αμέσως σε αλατούχο διάλυμα. Έτσι, εάν ο μέγιστος αριθμός αυγών του πυγμαίου ταινίας επιπλέει μετά από 15-20 λεπτά, τότε το ascaris - μετά από 1,5-2 ώρες, το whipworm - μετά από 2-3 ώρες.

Έτσι, τα πλεονεκτήματα αυτής της μεθόδου περιλαμβάνουν τη φθηνότητα και τη διαθεσιμότητά της, τα μειονεκτήματα είναι η ανάγκη προβολής παρασκευασμάτων στην επιφανειακή μεμβράνη και το ίζημα, καθώς και η διάρκεια καθίζησης.

Η μέθοδος του E. V. Kalantaryan είναι επίσης μέθοδος εμπλουτισμού, αλλά είναι πιο αποτελεσματική και απλούστερη από τη μέθοδο Fülleborn. Χρησιμοποιείται κορεσμένο διάλυμα νιτρικού νατρίου με σχετική πυκνότητα 1,38. Ως εκ τούτου, τα αυγά των περισσότερων ελμινθών επιπλέουν και βρίσκονται στο επιφανειακό φιλμ· δεν απαιτείται εξέταση ιζήματος.

Για να παρασκευαστεί ένα κορεσμένο διάλυμα νιτρικού νατρίου, 1 kg νιτρικού άλατος νατρίου (νιτρικό νάτριο) διαλύεται σε 1 λίτρο νερό και βράζεται μέχρι να διαλυθεί πλήρως και να σχηματιστεί μια μεμβράνη στην επιφάνεια. Χωρίς φιλτράρισμα, αδειάστε σε στεγνό μπουκάλι. Ελλείψει νιτρικού νατρίου, μπορεί να αντικατασταθεί με νιτρικό αμμώνιο (νιτρικό αμμώνιο), διαλύοντας 1,7 kg ανά 1 λίτρο νερού. Η σχετική πυκνότητα του διαλύματος που προκύπτει είναι 1,3, γεγονός που μειώνει κάπως την απόδοση σε σύγκριση με το διάλυμα νιτρικού νατρίου.

Πλεονεκτήματα της μεθόδου: τα αυγά των περισσότερων ελμινθών αναδύονται γρήγορα και βρίσκονται στην επιφανειακή μεμβράνη, γεγονός που εξαλείφει την ανάγκη μελέτης του ιζήματος. Τα μειονεκτήματα της μεθόδου είναι η ανεπάρκεια νιτρικού νατρίου, καθώς και το γεγονός ότι τα αυγά τρηματωδών, οι ογκόσφαιρες taeniid δεν επιπλέουν και παραμένουν στο ίζημα. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι με παρατεταμένη (περισσότερες από 1-2 ώρες) έκθεση περιττωμάτων σε διάλυμα, τα αυγά ορισμένων ελμινθών αρχίζουν να διογκώνονται και να καθιζάνουν, εξαφανίζονται από την επιφανειακή μεμβράνη.

μέθοδοι καθίζησης

Η μέθοδος του P. P. Goryachev βασίζεται στην αρχή της καθίζησης αυγών. Το επίχρισμα σε αυτή την περίπτωση είναι ελαφρύ, χωρίς χονδροειδείς προσμίξεις, γεγονός που διευκολύνει τον εντοπισμό μικρών ωαρίων τρεματωδών (οπισθορχία κ.λπ.). Το ειδικό βάρος των αυγών οπίσθορκας είναι υψηλό, επομένως δεν επιπλέουν σε αλατούχα διαλύματα.

70-100 ml κορεσμένου διαλύματος χλωριούχου νατρίου χύνεται σε κύλινδρο με διάμετρο 2-3 cm. Ξεχωριστά, ανακατέψτε καλά 0,5 g περιττωμάτων σε 20-25 ml νερού και διηθήστε προσεκτικά μέσα από ένα χωνί με δύο στρώσεις γάζας σε έναν κύλινδρο. αλατούχο διάλυμα, αποφεύγοντας την ανάμειξη (ώστε να σχηματιστούν δύο σαφώς οριοθετημένες στρώσεις). Μετά από 2-3 ώρες, το ανώτερο στρώμα με τα κόπρανα αναρροφάται με μια πιπέτα και το υπόλοιπο αλατούχο διάλυμα αφήνεται να παραμείνει για 12-20 ώρες ή φυγοκεντρείται. Το ίζημα διοχετεύεται με σιφώνιο σε γυάλινη πλάκα, καλύπτεται με καλυπτρίδα και υποβάλλεται σε μικροσκόπιο.

Η μέθοδος του Goryachev προτάθηκε για την ανίχνευση ωαρίων οπίστορα και αποδείχθηκε πιο αποτελεσματική από την εξέταση του εγγενούς επιχρίσματος και τη μέθοδο Fülleborn. Επί του παρόντος, για τη διάγνωση της οπισθορχίασης (κλονορχίαση), οι μέθοδοι Kato και Kalantaryan συνιστώνται ως αρκετά αποτελεσματικές και τεχνικά απλούστερες.

Μέθοδος Krasilnikov. Υπό την επίδραση επιφανειοδραστικών ουσιών, που αποτελούν μέρος του απορρυπαντικά(απορρυπαντικά), τα αυγά ελμινθών απελευθερώνονται από τα κόπρανα και συγκεντρώνονται στο ίζημα.

Ένα διάλυμα 1% σκόνης πλυσίματος Lotus παρασκευάζεται προκαταρκτικά. Για να γίνει αυτό, 10 g σκόνης διαλύονται σε 1 λίτρο νερό βρύσης. Ελλείψει "Lotus" μπορείτε να χρησιμοποιήσετε άλλα σκόνες πλυσίματος, αλλά το καθένα από αυτά πρέπει να λαμβάνεται όσο θα διαλυθεί χωρίς να σχηματιστεί ίζημα σε 1 λίτρο νερό βρύσης. 20-30 ml διαλύματος απορρυπαντικού χύνεται σε γυάλινο δοχείο χωρητικότητας 30-50 ml, τοποθετείται εκεί μια μικρή μερίδα περιττωμάτων και αναμειγνύεται καλά. Η αναλογία περιττωμάτων και διαλύματος πρέπει να είναι περίπου 1:20. Τα κόπρανα πρέπει να βρίσκονται στο διάλυμα για τουλάχιστον μία ημέρα. Στο διάστημα αυτό σχηματίζεται ένα ίζημα 2-3 στρώσεων στον πυθμένα. Το κάτω στρώμα αποτελείται από χοντρά βαριά σωματίδια, τα αυγά των ελμινθών συγκεντρώνονται στο μεσαίο στρώμα, το ανώτερο στρώμα είναι λευκο-γκρι νιφάδες. Στη συνέχεια, με μια πιπέτα, συλλέγονται 2-3 σταγόνες υγρού από το μεσαίο στρώμα και μεταφέρονται σε μια γυάλινη πλάκα. Παρασκευάζονται 2 παρασκευάσματα σε ένα ποτήρι, καλύπτονται με καλυπτρίδα και υποβάλλονται σε μικροσκόπιο.

Η μέθοδος Krasilnikov σάς επιτρέπει να ανιχνεύσετε αυγά όλων των τύπων ελμινθών που απεκκρίνονται με κόπρανα.

Η μέθοδος καθίζησης αιθέρα-φορμαλίνης και η μέθοδος χημικής καθίζησης είναι πολύ επίπονη, με υψηλή απόδοση, ειδικά σε μαζικές εξετάσεις· επομένως, είναι πιο σκόπιμο να χρησιμοποιηθεί η μέθοδος αιθέρα-οξικού. Επιτρέπει, μετά από πρόσθετη επεξεργασία του ιζήματος με χημικά αντιδραστήρια, να ληφθούν πρακτικά μόνο αυγά ελμινθών σε αυτό, γεγονός που διευκολύνει την αναγνώριση μικρών αυγών τρηματωδών. Αυτή η μέθοδος αποδείχθηκε καθολική, αποκαλύπτοντας τα αυγά όλων των εντερικών ελμινθών, τις κύστεις των εντερικών πρωτόζωων, μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για ποσοτικοποίησηένταση εισβολής.

Ρίξτε 7 ml διαλύματος 10% σε διαβαθμισμένους σωλήνες φυγοκέντρησης. οξικό οξύκαι προσθέστε 1 g κόπρανα στο σημάδι των 8 ml. Τα κόπρανα αναμειγνύονται καλά με ένα ραβδί μέχρι να σχηματιστεί ένα ομοιογενές μείγμα και στη συνέχεια διηθείται μέσω δύο στρώσεων γάζας σε άλλο σωλήνα φυγοκέντρησης (έτσι ώστε ο νέος σωλήνας του φιλτραρισμένου διαλύματος να έχει και πάλι 8 ml, αν λιγότερα, τότε μπορείτε επιπλέον να ξεπλύνετε το χωνί με επίδεσμο με διάλυμα οξικού οξέος 10%, μέσω του οποίου διήθησε το διάλυμα των κοπράνων). Σε αυτό το σωληνάριο προσθέστε 2 ml αιθέρα (μέχρι το σημάδι των 10 ml), πώμα και ανακινήστε δυνατά για 30 δευτερόλεπτα. Το μίγμα φυγοκεντρείται στις 3000 rpm για 1 λεπτό (ή 2 λεπτά στις 1500 rpm). Το πηκτικό στρώμα (με τη μορφή φελλού στο πάνω μέρος του σωλήνα) διαχωρίζεται από τα τοιχώματα του σωλήνα με ένα ραβδί και στραγγίζεται προσεκτικά μαζί με το υπερκείμενο. Το ίζημα (συνήθως μικρό, άχρωμο) εφαρμόζεται σε γυάλινες πλάκες με σιφώνιο, καλυμμένο με καλυπτρίδα και μικροσκόπιο.

Τις περισσότερες φορές, η μόλυνση με έλμινθες συμβαίνει μέσω μολυσμένων τροφίμων, νερού και επίσης μέσω άπλυτων χεριών.

Άμεσες και έμμεσες μέθοδοι διάγνωσης ελμινθιασών

Μέχρι σήμερα έχουν αναπτυχθεί πολλές μέθοδοι διαγνωστικάελμινθίασες, αλλά όλες μπορούν να χωριστούν σε δύο μεγάλες ομάδες: άμεσο και έμμεσο. Οι άμεσες διαγνωστικές μέθοδοι περιλαμβάνουν εκείνες τις μελέτες που σας επιτρέπουν να προσδιορίσετε άμεσα τους έλμινθους, τα θραύσματά τους, τις προνύμφες ή τα αυγά τους. Οι έμμεσες μέθοδοι για τη διάγνωση ελμινθίασης βασίζονται στον εντοπισμό δευτερογενών αλλαγών χαρακτηριστικών μιας συγκεκριμένης ποικιλίας ελμινθίασης.

Οι πιο δημοφιλείς άμεσες μέθοδοι για τη διάγνωση των ελμινθιασών είναι οι μακρο- και οι μικροελμινθοσκοπικές μέθοδοι έρευνας.

Μακροελμινθοσκοπικές μέθοδοι έρευνας

Ερωτήσεις από αναγνώστες

18 Οκτωβρίου 2013, 17:25 Καλό απόγευμα. Εδώ και ένα χρόνο περίπου νιώθω φαγούρα γύρω από τον πρωκτό. Κανένας πόνος. Πείτε μου με ποιον να επικοινωνήσω και τι μπορεί να είναι; Ευχαριστώ

Κάνε μια ερώτηση

Μέθοδοι έρευνας μικροελμινθοσκόπησης

Ανοσολογικές μέθοδοι έρευνας

Η διάγνωση των ελμινθασών βασίζεται στην ανίχνευση ειδικών αντισωμάτων σε ορισμένους έλμινθους στον ορό του αίματος. Για ανοσολογικές μελέτες χρησιμοποιείται η μέθοδος της έμμεσης αιμοσυγκόλλησης, ενζυμική ανοσοδοκιμασία, ανοσοηλεκτροφόρηση, ανοσοαπορρόφηση και άλλες ορολογικές μεθόδους αιματολογικών εξετάσεων.

Οι μέθοδοι ανοσολογικής έρευνας χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση της κυψελοκοκκίασης, της εχινοκοκκίασης, της κυστικέρκωσης, της ασκαρίασης, της σχιστοσωμίασης και άλλων ελμινθιών.

Ανάλυση του περιεχομένου της χολής και του δωδεκαδακτύλου

Βιοψία

Διαγνωστικά ηλεκτροπαρακέντησης

Τα διαγνωστικά ηλεκτροπαρακέντησης βασίζονται στην ανάλυση της αντοχής του δέρματος όταν ερεθίζεται από την αδύναμή του ηλεκτροπληξία. Η ηλεκτροπαρακέντηση για υποψία ελμινθίασης μπορεί να πραγματοποιηθεί με δύο τρόπους: με τη μέθοδο Voll ή με έλεγχο συντονισμού.

Μέθοδοι ενόργανης έρευνας

Με ελμινθίαση, πραγματοποιείται επίσης διαδικασία υπερήχων, FEDGS και διαγνωστικά υπολογιστών. Αυτές οι μέθοδοι σάς επιτρέπουν να προσδιορίσετε τον βαθμό βλάβης που προκαλείται από έλμινθους, καθώς και να προσδιορίσετε την κατάσταση των μεμονωμένων οργάνων.