Materijal za istraživanje bjesnoće. Laboratorijska dijagnostika bjesnoće. Babes-Negrijeva metoda detekcije inkluzije

Uzrokovana virusom bjesnoće. Štoviše, ne samo za samog ljubimca, već i za njegovu okolinu (vlasnika i ostale članove obitelji). Virus uzrokuje upalu mozga kod ljudi i životinja. Na bolest su posebno osjetljive lisice, vukovi, mačke, krupna i sitna stoka, psi, ovce, koze, konji itd. Kućni ljubimci i ljudi zaraze se njihovim ugrizom životinja s bjesnoćom ili od sline koja dolazi u dodir s oštećenom kožom, sluznicom ili očima. Slina može postati zarazna i do 10 dana prije nego što se pojave znakovi bjesnoće.
Trenutno postoje opisi drugih puteva prijenosa: metoda zraka (alimentarna - kroz hranu i vodu) i transplacentalna metoda (kroz placentu tijekom trudnoće).
Virus, šireći se duž živčanih putova, dolazi do žlijezda slinovnica i nervne ćelije cerebralni korteks i, udarajući u njih, uzrokuje teška nepovratna oštećenja.

bolest životinjskog bjesnoće registrirani diljem svijeta (jedina iznimka su Japan, Australija i UK).

Nažalost, Rusija nije uključena u popis iznimaka. Moskva i Moskovska regija također su povoljno okruženje za pojavu bjesnoće kod domaćih i divljih životinja.
Virus je nestabilan u vanjskom okruženju - umire kada se zagrije na 56 stupnjeva za 15 minuta, a kada se kuha za 2 minute. Virus bjesnoće također je osjetljiv na ultraljubičasto i direktno sunčeve zrake. Međutim, virus bjesnoće je otporan na niske temperature i antibiotike.

Trajanje inkubacije tijekom infekcije bjesnoćom može trajati od nekoliko dana do nekoliko mjeseci (u prosjeku 3-6 tjedana). Bjesnoća kod ljudi može trajati i do godinu dana. Manifestacija klinička slika prethodi latentno (inkubacijsko) razdoblje. Životinja je također opasna u ovom trenutku.

Simptomi i znakovi bjesnoće kod životinja

Znakovi bjesnoće može se pojaviti kod životinje nekoliko tjedana nakon ugriza bijesne životinje ili kontakta s virusom. Obratite pozornost na ponašanje vašeg ljubimca. Svako neadekvatno i neprirodno ponašanje životinje trebalo bi vas upozoriti i budite pažljiviji. U nekim slučajevima temperatura može porasti.
Kao što znate, divlje životinje se boje ljudi. U slučaju bolesti, divlje životinje mogu prići kući, pa čak i napasti stoku i ljude. Stoga, ako se vaš ljubimac počeo ponašati agresivno ili pretjerano nježno, onda je to ozbiljan poziv, kako ne biste riskirali i uzrokovali specijalist veterinarske medicine za pregled i dijagnozu vjerojatnosti bjesnoće.

Često bi nespecifični simptomi i nepouzdana intravitalna dijagnoza trebali isključiti opcije "nasumično", jer govorimo o kobnim posljedicama ne samo za kućnog ljubimca, već s velikom vjerojatnošću i za vlasnika.

Dijagnoza bjesnoće kod životinja

Dijagnoza se postavlja na temelju složenih podataka i laboratorijske pretrage. 100% pouzdana metoda za in vivo dijagnostiku bjesnoće kod životinja korištena u veterinarska praksa, trenutno ne postoji.
Vitalni virusni antigen može se otkriti pomoću MFA u otiscima rožnice životinja s bjesnoćom. Također, virus se može izolirati iz nekih tkiva i tjelesnih tekućina. Ali ipak, negativan rezultat ove metode ne isključuje mogućnost infekcije bjesnoćom.
U post mortem dijagnozi bjesnoće kod životinja rezultati su točniji, jer. primjenjuju se druge metode. Na primjer, jedna od točnih patoanatomskih dijagnoza u proučavanju mozga je otkrivanje specifičnih inkluzija (Babes-Negrijeva tijela). Također, biološki test ostaje najvažnija metoda - intracerebralna infekcija.
Prepreka za dijagnosticiranje bjesnoće kod životinja također je prisutnost razne forme tijek bolesti. Veterinari su konvencionalno podijelili manifestaciju bjesnoće u tri oblika (neki oblici imaju različite faze).

Oblici razvoja i tijek bjesnoće kod životinja (klinička slika):

Nasilni oblik bjesnoće:
1 faza. Životinja izbjegava ljude, skriva se na tamnom i osamljenom mjestu. Može se pojaviti atipično ponašanje - pojačana naklonost ili pasivna agresija. U tom slučaju može se pojaviti svrbež na mjestu ugriza. Životinja može lizati ili gristi mjesto ulaska virusa (ozljeda). Apetit se smanjuje. Javljaju se povraćanje, lučenje sline i halucinacije. Akt gutanja je otežan.
Faza 2. Postoji izražena agresija. Anksioznost raste, postoji sklonost jedenju nejestivih predmeta. Nesvjesna želja za kretanjem. Životinja može gristi vlastito tijelo (samoozljeđivanje), gristi okolne predmete, streljivo, zemlju. Napad na druge životinje, pa čak i na vlasnika. Kućni ljubimac ne može progutati vodu. Zbog toga dolazi do obilne i nekontrolirane salivacije. Jesti nije moguće. Manifestacija napadaji. Dolazi do djelomične paralize mišića lica i skupine udova. Kao rezultat toga, razvija se strabizam, donja čeljust se spušta, jezik ispada iz usta.
3 faza (terminalni – paralitički). Depresivno stanje. Teško iscrpljivanje tijela, razvoj paralize. Kućni ljubimac gotovo stalno leži i pada u komu i komu. Smrt nastupa kao posljedica zastoja disanja zbog paralize dišnih mišića.

Tihi oblik bjesnoće:
Tihi oblik karakterizira razvoj paralize, salivacije, nemogućnosti jesti. Nakon 2 - 4 dana ljubimac umire. Faza ekscitacije (bijesa) je kratkotrajna ili je nema.

Atipični oblik bjesnoće:
Atipični oblik (dijagnosticira se kompleks). Može doći do proljeva ili intestinalne atonije. Možda kratkoročno poboljšanje stanja, nakon čega slijedi progresivno neurološki simptomi. Kao rezultat toga, ljubimac umire. Ova faza tijeka bjesnoće može trajati do 3 mjeseca ili više.

Kod goveda prevladava tihi oblik. Uzbuđenje je u ovom slučaju slabo izraženo, primjećuje se promuklo mukanje, salivacija, nestabilan hod, brzo se razvija paraliza udova. Često atipičan tijek - odbijanje hranjenja, atonija proventrikulusa, česti nagoni za defekaciju, napadaji, zatim se razvija paraliza. U nasilnom obliku u trenutku napadaja životinje se otpuštaju s uzice, urlaju, kopaju zemlju, bacaju se na zidove, napadaju druge životinje svoje vrste, a posebno su agresivne prema psima.
Kod ovaca i koza bolest se odvija gotovo isto kao i kod goveda, ali se paraliza razvija brže (drugi dan).
Kod konja i svinja prevladava nasilni oblik.

Prevencija bjesnoće kod životinja

Najučinkovitiji i najučinkovitiji način prevencije životinjskog bjesnoće je cijepljenje. Prema zakonu Ruske Federacije, godišnje cijepljenje je obavezno za sve domaće i domaće životinje. Danas postoji veliki izbor cjepiva protiv bjesnoće kod životinja, uvoznih i domaćih proizvođača. Moderna cjepiva osiguravaju stvaranje imuniteta unutar tri godine. Godišnje cijepljenje protiv bjesnoće životinja ne predstavlja opasnost za zdravog ljubimca.

Bjesnoća - akutno zarazna bolest teče s teškim oštećenjima živčani sustav obično fatalno. Osjetljivi su ljudi i svi sisavci.

Bjesnoća je sveprisutna. Uzročnika infekcije prenose psi, mačke, divlji glodavci i grabežljivci te šišmiši vampiri koji sišu krv.

Trajanje inkubacije ovisi o mjestu i jačini ugriza, količini i virulenciji virusa koji je ušao u ranu te otpornosti ugrizene životinje. Razdoblje inkubacije traje od 1-3 tjedna do godinu dana ili čak i više.

Bolest teče akutno. Klinički znakovi u osnovi su isti kod svih životinja, ali su najtipičniji kod pasa, koji mogu imati i buran i tih (paralitički) tijek bolesti. U goveda se bjesnoća može javiti atipično (gubitak apetita, atonija buraga, paraliza ždrijela, lučenje sline). Možda nema stadija uzbuđenja.

Patološke promjene nespecifičan. Kod mesojeda (uglavnom pasa) u želucu se mogu naći strani predmeti.

Virus bjesnoće ima izraženu neuroprobaziju. Prodirući s periferije (mjesta ugriza) po živčanim deblima u središnji živčani sustav centripetalno, širi se po tijelu centrifugalno po perifernim živcima i ulazi u razne organe, uključujući i žlijezde slinovnice.

Virus se primjenjuje obitelji Rhabdoviridae, ljubazan Lyssavirus. Virioni su štapićastog oblika sa skraćenim krajem. Virion virus - RNA koja sadrži sa spiralnom vrstom simetrije, ima lipoproteinsku ljusku. Niske temperature sačuvati virus. Temperatura od 60 ° C ubija ga za 5-10 minuta, sunčeva svjetlost - za 5-7 dana. Otopine formalina, fenola, klorovodične kiseline (5%) inaktiviraju virus za 5-10 minuta.

Virion virusa bjesnoće sadrži glikoprotein (vanjski) i nukleokapsid (unutarnji) antigene. Glikoproteinski antigen inducira stvaranje antitijela koja neutraliziraju virus, a antigen nukleokapsida inducira stvaranje antitijela za fiksaciju komplementa i precipitaciju.

U tijelu je virus lokaliziran uglavnom u središnjem živčanom sustavu, kao iu žlijezde slinovnice oh i slina.

kultiviran na miševima, zečevima, zamorcima i drugim životinjama, kao iu primarnim kulturama stanica (bubrezi hrčka, ovčji embriji, telad itd.) i transplantiranim stanicama. Reprodukcija virusa u kulturama stanica ne očituje se uvijek CPD-om. Pileći embriji također su nakon preliminarne prilagodbe osjetljivi na virus bjesnoće. Virus potiče stvaranje citoplazmatskih inkluzijskih tjelešaca koja se najčešće nalaze u stanicama amonovog roga, malog mozga i kore velikog mozga.

izvor infekcije su bolesne životinje. Oni prenose virus kada ugrizu. Mesojedi se mogu zaraziti jedući glavu i leđna moždinaživotinja ubijenih od bjesnoće. Dokazana je mogućnost zaraze bjesnoćom aerogenim putem (na mjestima gdje ima šišmiša). Do 1960-ih godina glavni izvor bjesnoće bili su psi i mačke, kasnije lisice, vukovi, korsaci i druge divlje životinje.

Dijagnoza bjesnoće se postavlja na temelju epidemioloških, kliničkih podataka i rezultata laboratorijska istraživanja koji su od odlučujuće važnosti.

Pri radu s bolesnim životinjama i zaraznim materijalom potrebno je strogo pridržavati se mjera osobne zaštite: nositi gumene rukavice, ogrtače s narukavima, gumenu ili polietilensku pregaču, gumene čizme, zaštitne naočale i masku za lice.

Zabranjeno je otvaranje životinja sumnjivih na bjesnoću u polju.

Dobivanje patološkog materijala. Za istraživanje na bjesnoću u laboratorij se šalju svježi leševi malih životinja u cjelini, a od velikih i srednjih životinja - glava s prva dva vratna kralješka. Leševi malih životinja prije slanja na istraživanje tretiraju se insekticidima.

Patološki materijal se pakira u plastične vrećice, stavlja u dobro zatvorene kutije s jastučićem za upijanje vlage impregniranim dezinficijensom. Materijal i popratni dopis s naznakom pošiljatelja i njegove adrese, vrste životinje, anamnestičkih podataka i obrazloženja sumnje da je životinja bolovala od bjesnoće, datuma i potpisa liječnika.

Laboratorijska dijagnostika. Uključuje: otkrivanje virusnog antigena u RIF-u i RDP-u, Babes-Negrijevim tjelešcima i biološke testove na bijelim miševima.

GREBEN. Za ovu reakciju bioindustrija proizvodi fluorescentni gama globulin protiv bjesnoće.

RIF tehnika postavljanja . Tanki otisci ili razmazi pripremaju se na odmašćenim stakalcima iz raznih dijelova mozga lijevog i desna strana(Amonov rog, cerebralni korteks, cerebelum, medulla oblongata). Pripremite najmanje dva preparata svakog dijela mozga. Također možete pregledati leđnu moždinu, submandibularne, žlijezde slinovnice. Za suzbijanje se izrađuju pripravci od mozga zdrave životinje (najčešće bijelog miša).

Preparati se suše na zraku, fiksiraju u ohlađenom acetonu (minus 20 °C od 4 do 12 sati), suše na zraku, nanosi se fluorescentni gama globulin, stavljaju u vlažnu komoru na 37 °C 25-30 minuta, zatim se temeljito pročišćavaju. isprati fiziološkom otopinom ili fosfatnim puferom pH 7,4, isprati destiliranom vodom, osušiti na zraku, nanijeti nefluorescentnim uronjenim uljem i promatrati pod fluorescentnim mikroskopom.

U pripravcima koji sadrže antigen virusa bjesnoće pojavljuju u različitim veličinama i oblicima fluorescentne žutozelene granule u neuronima ali češće izvan stanica.

Ne bi trebalo biti takvog sjaja u kontroli, živčano tkivo obično svijetli mutno sivkastom ili zelenkastom bojom. Intenzitet sjaja ocjenjuje se u križićima.

Rezultat se smatra negativnim u nedostatku specifične fluorescencije.

Materijal od životinja cijepljenih protiv bjesnoće ne može se pregledati u RIF-u 3 mjeseca. nakon cijepljenja, jer može doći do fluorescencije antigena virusa cjepiva.

U RIF-u su tkiva konzervirana glicerinom, formalinom, alkoholom i

itd., kao i materijal koji pokazuje znakove čak i laganog raspadanja.

RDP u agar gelu . Metoda se temelji na sposobnosti antitijela i antigena da difundiraju u agar gelu i pri susretu formiraju vizualno vidljive precipitacijske linije (kompleks antigen + antitijelo). Koristi se za otkrivanje antigena u mozgu životinja koje su uginule od virusa ulične bjesnoće ili tijekom eksperimentalne infekcije (biotest).

Pripada rodu Lyssavirus (grčki lyssa - bjesnoća). Uzrokuje smrtonosnu infekciju kod životinja i ljudi, koju karakterizira nepovratno oštećenje neurona CNS-a. Godine 1885. L. Pasteur je eksperimentalno potkrijepio metodu atenuacije još nepoznatog patogena i dobio cjepivo protiv bjesnoće. 1892. V. Babes i 1903. A. Negri opisali su specifične inkluzije u neuronima mozga životinja ubijenih od bjesnoće (Negrijeva tjelešca). Poznato je nekoliko srodnih biovara uzročnika: "divlji" virus jelena, arktičkih lisica i lisica na Arktiku, virus šišmiša u Americi, virus "bijesnog psa" u zapadnoj Africi itd.

Uzgoj i reprodukcija

Virus bjesnoće se uzgaja u kulturi stanica bubrega novorođenih hrčaka, u ljudskim diploidnim stanicama. Citopatogena aktivnost je nestabilna. Virus se može prilagoditi na kokošje i pačje embrije inficiranjem žumanjčane vrećice.

Patogeneza i imunitet

Na ulaznim vratima infekcije virus ostaje nekoliko dana. Čini se da se primarna reprodukcija događa u stanicama mišićno tkivo na mjestu ugriza. Tada virusne čestice dospijevaju do krajeva osjetljivih perifernih živaca, kreću se duž njihovih aksijalnih cilindara i perineuralnih prostora (do 3 mm na sat), utječući na neurone leđne moždine i mozga. Različite brzine kretanja virusa duž živčanih debla mogu objasniti trajanje razdoblja inkubacije infekcije. Minimalno je (do 10-14 dana) kada uzročnik prodre koža glave i lica, a najdulje (1,5 mjesec i više) s ugrizima u udove (šake, stopala). U neuronima dolazi do intenzivne reprodukcije virusa, što rezultira pojavom citoplazmatskih Babes-Negrijevih tjelešaca koja sadrže virusne nukleokapside. Posebno su intenzivno zahvaćeni neuroni amonovog roga, medule oblongate i Purkinjeove stanice malog mozga.U organizmu se sintetiziraju virusneutralizirajuća protutijela koja mogu djelovati protektivno prije nego što uzročnik uđe u stanice središnjeg živčanog sustava.

Epidemiologija

Rezervoar virusa u prirodi su razne toplokrvne životinje. Šišmiši mogu razviti kronične asimptomatske infekcije. Na uzročnika bjesnoće najosjetljiviji su psi, lisice, vukovi, šakali, te mačke i risovi. Najčešće se osoba zarazi od bolesnih lisica i mačaka s bjesnoćom, rjeđe od pasa i drugih životinja kod kojih se virus nalazi u žlijezdama slinovnicama i izlučuje se u vanjski okoliš sa slinom. Virus se prenosi ugrizom i slinom na oštećenu kožu i sluznicu.Čovjek je slijepa ulica u cirkulaciji virusa,prijenos uzročnika s čovjeka na čovjeka izuzetno je rijedak.Virus bjesnoće je osjetljiv na toplinu. Na 56 ° C, inaktivacija se događa za 60 minuta, na 80-100 ° C - za 1 minutu. Brzo se inaktivira u otopinama lužina, joda, deterdženata i UV zračenja. Polagano sušenje dovodi do inaktivacije patogena u materijalu za nekoliko dana, au uvjetima liofilizacije virus godinama perzistira u zahvaćenom tkivu, pomoću reakcije imunofluorescencije. U slini oboljelih ljudi iu mozgu umrlih, prisutnost virusa može se utvrditi intracerebralnom infekcijom bijelih miševa, kod kojih se razvije paraliza udova i ubrzo uginu.

Prevencija

Trenutno se koriste živa i inaktivirana cjepiva.

Bjesnoća

Virus bjesnoće pripada rodu Lyssavirus obitelji Rhabdoviridae, ima karakterističan sferni oblik s jednim ravnim i drugim zaobljenim krajem. Postoje dvije verzije virusa - ulični (divlji), koji kruži u prirodi među životinjama, i oslabljeni - Virus fixe, dobiven JI. Pasteur opetovanim prolazima kroz mozak kunića Bjesnoća je češća kod pasa, vukova, lisica, šakala, mačaka, rjeđe kod krava, tvorova, kojota i šišmiša. Infekcija osobe događa se kroz ugrize bolesnih životinja, pa čak i kada sline ogrebotine na koži ili sluznici. Bolest kod ljudi uvijek završava smrtno, glavne metode za dijagnosticiranje bjesnoće su post mortem, iako su razvijeni i neki intravitalni testovi.

Laboratorijska dijagnostika

Laboratorijska dijagnostika temelji se na uporabi virusoskopskih, bioloških i seroloških metoda. Materijal za studiju je mozak životinja i mrtvih ljudi, slina, tkivo žlijezda slinovnica, koji se šalju u laboratorij u sterilnoj posudi s glicerinom i obloženoj ledom.

Metoda fluorescentnih antitijela

Metoda fluorescentnih antitijela je najbrža i točna metoda laboratorijska dijagnostika bjesnoća. Za otkrivanje virusnog antigena u razmazima-otiscima mozga, žlijezda slinovnica i rožnice oka (intravitalni test) koriste se izravne i neizravne reakcije imunofluorescencije. Razmazi se fiksiraju u hladnom acetonu 8-10 sati na 4°C i tretiraju u vlažnoj komori 30 minuta s FITC-obilježenim imunoglobulinom protiv bjesnoće, isperu fosfatnim puferom, osuše i pregledaju pod fluorescentnim mikroskopom. Virusni antigeni promatrani kao zelene granule različite oblike i veličina.

Detekcija Babes-Negrijevih tijela

Otkrivanje Babes-Negrijevih tjelešaca u otiscima razmaza, histološkim presjecima mozga i tkivu žlijezda slinovnica također je brza metoda za dijagnosticiranje bjesnoće. Iz mozga umrle osobe ili životinje sterilnim se škarama izrežu u poprečnom smjeru ploške debljine 3-4 mm od produžene moždine, Amonovog roga i malog mozga. Predmetno staklo se pritisne na površinu reza kako bi se ostavio otisak tkiva. U pripravcima obojenim prema Muromtsevu ili Selleru, tijela su različite veličine (4-10 mm), okrugla ili ovalna ljubičasto-crvena, a citoplazma i jezgre živčanih stanica su plave. Histološki rezovi se boje prema Romanovsky-Giemsi, Mannu ili Turevichu. Jedna stanica može sadržavati jedno ili više tijela. Okruženi su jasno definiranom ljuskom i imaju unutarnju strukturu u obliku bazofilne granularnosti, često smještene u blizini jezgre.

Babes-Negrijeva metoda detekcije inkluzije

Babes-Negrijeva inkluzijska metoda detekcije prilično je specifična za bjesnoću, iako je manje osjetljiva od metode fluorescentnih antitijela. U moždanom tkivu pasa tijela se nalaze u 90-95% slučajeva, a kod ljudi koji su umrli od bjesnoće - u 70%.Stoga nepostojanje Babes-Negrijevih tijela ne isključuje dijagnozu bjesnoće. U takvim slučajevima potrebno je koristiti druge metode istraživanja.

Biotest na miševima

Biološkom metodom izolira se virus bjesnoće iz moždanih tkiva, žlijezda slinovnica lešina i sline bolesnih ljudi i životinja (doživotni test). Najprikladniji za infekciju su miševi koji sisaju. Za postavljanje biološkog testa koristi se 15-20 životinja. Infekcija se provodi pod anestezijom intracerebralnom injekcijom 0,03 ml suspenzije ispitivanog materijala. Možete staviti biološki uzorak Sirijski hrčci, inficirajući ih materijalom intramuskularno.U prisutnosti virusa bjesnoće u ispitivanom materijalu, miševi doživljavaju mišićni tremor, paralizu. U većini slučajeva životinje uginu unutar pet dana. Prisutnost virusa bjesnoće kod zaraženih i uginulih miševa mora se potvrditi izravnim imunofluorescentnim testom ili detekcijom Babes-Negrijevih tjelešaca.Identifikacija otkrivenog virusa bjesnoće također se provodi pomoću neutralizacijskog testa na bijelim miševima.

Serološke studije

Serološke studije se provode kako bi se utvrdio imunitet nakon cijepljenja. Protutijela protiv virusa bjesnoće nalaze se u reakcijama neutralizacije, fiksacije komplementa, imunofluorescencije. Osjetljive su imunosorbentske reakcije (radioimune i enzimske imunološke pretrage).

Nedosekov V.V., Vishnyakov I.O., Gruzdev K.N. VNIIVViM, VGNKI

Jedan od najstarijih i najopasnijih zarazne bolestičovječanstvo je ludo. Opasnost koju bjesnoća predstavlja za živote ljudi i životinja, nažalost, nema tendenciju smanjenja.

Praktični značaj ove bolesti određen je njezinom širokom rasprostranjenošću među mnogim životinjskim vrstama, visokim smrtnim ishodom pacijenata s bjesnoćom i nedostatkom učinkovita sredstva liječenje.

Unatoč činjenici da epizootiju bjesnoće trenutno podržavaju uglavnom divlje životinje, ljudima prijete prije svega psi i mačke. Stoga se velika pažnja posvećuje pitanjima dijagnosticiranja bolesti kod pasa.

Suvremena i precizna laboratorijska dijagnostika bjesnoće, posebice brza dijagnostika, ostaje relevantna za praktičnu veterinarsku medicinu.

Bjesnoća pasa dijagnosticira se i post mortem i in vivo.

Post mortem dijagnoza.

a) otkrivanje antigena

Brza i osjetljiva metoda za dijagnosticiranje bjesnoće u pasa je metoda fluorescentnih antitijela (MFA), koja se temelji na mikroskopskom pregledu ultraljubičastim zrakama otisaka, razmaza i kriokonzerviranih isječaka tkiva tretiranih antirabičnim globulinom konjugiranim s fluorescein izotiocijanatom. Kao alternativa MFA, na terenu se može primijeniti histokemijska varijanta enzimski imunološki test, koji omogućuje identifikaciju specifičnog antigena u raspadnutom i konzerviranom materijalu, osim toga, svjetlosni mikroskop dovoljan je za bilježenje rezultata testa.

Široko rasprostranjen za dijagnozu bjesnoće primio je "Sendvič" - varijantu enzimskog imunoanalize, metoda se temelji na sorpciji antigena u različitim razrjeđenjima na imobiliziranim specifičnim globulinima, nakon čega slijedi detekcija antigena globulinima konjugiranim s peroksidazom hrena. . Osim toga, u reakciji se koriste i poli- i monoklonska protutijela, pri čemu se potonjima nedvojbeno daje veća prednost zbog njihove specifičnosti, avidnosti, stabilnosti i odsutnosti nespecifičnih reakcija.

Jedan od naj precizni testovi otkrivanje antigena bjesnoće je lančana reakcija polimeraze. Ova metoda omogućuje dijagnosticiranje bjesnoće čak iu prisutnosti najmanje jednog viriona u materijalu. Test se temelji na komplementarnom kompletiranju RNA uzorka, provedenom in vitro pomoću enzima RNA polimeraze. No, lančana reakcija polimerazom još nije dovoljno razvijena za rutinsku dijagnostiku bjesnoće i još nije našla primjenu u laboratorijima.

b) izolacija virusa in vitro

Izolacija virusa može biti potrebna za potvrdu rezultata antigenskih testova i daljnju karakterizaciju izolata. U tu svrhu naširoko se koristi kultura stanica mišjeg neuroblastoma (Na C1300). Izolacija virusa u kulturi neuroblastoma je barem jednako učinkovita u otkrivanju malih količina virusa bjesnoće kao i izazov kod miševa. Osim toga, primjenom ove kulture vrijeme potrebno za dijagnozu smanjuje se s 10-15 na 2 dana, eliminira se potreba za pokusnim životinjama, a troškovi istraživanja značajno se smanjuju. Međutim, unatoč tome, intracerebralna infekcija miševa ostaje važna metoda za laboratorijsku dijagnostiku pseće bjesnoće.

In vivo dijagnoza.

Važan aspekt dijagnostike bolesti je doživotna dijagnostika, a što ranije postavljanje dijagnoze od velike je važnosti za donošenje odluke o primjeni imunoprofilakse. Virusni antigen može se otkriti pomoću MFA u otiscima rožnice ili biopsijama kože životinja s bjesnoćom. Osim toga, virus se može izolirati iz određenih tkiva i tjelesnih tekućina, posebice sline i cerebrospinalne tekućine. Međutim, ako pozitivan rezultat test ukazuje na bolest bjesnoće, negativan rezultat ne isključuje mogućnost infekcije.

Ostali članci u ovom odjeljku

Biokemijska identifikacija životinjske klamidije
Biokemijski i imunološki parametri krvi pasa s demodikozom
Cjepivo "Microderm" - vrlo učinkovit lijek protiv dermatofitoze životinja
Utjecaj imunomodulatora na neke pokazatelje prirodne otpornosti
Utjecaj intenzivne antibiotske terapije u kuje u laktaciji na pojavu parvovirusnog enteritisa u štenadi
Helmintozoonoze pasa u Krasnodarskom području
Dijagnostičke i terapijske i profilaktičke mjere kraste kod mačaka
Imunoterapija u udruženju demodikoze - stafilokokoze pasa.
Umjetna infekcija pasa različitim vrstama trihinela
Primjena polistiren lateksa kao imunosorbenata za izradu antibruceloznih dijagnostikuma
O pitanju veterinarske skrbi za životinje u zoološkim vrtovima
Na pitanje nekih imunoloških parametara krvi pasa
Za liječenje životinja s trichophytosis
Klinički i patološki znakovi bolesti Aujeszkoga u pasa koji su oboljeli od konzumacije zaražene svinjetine

Bjesnoća je izuzetno opasna virusna bolest koju karakteriziraju teška oštećenja mozga i leđne moždine. Često završava smrću.

Bjesnoća se javlja kod svih sisavaca i prenosi se tjelesnim tekućinama, uglavnom slinom. Čovjek se njome najčešće zarazi ugrizom zaražene životinje, najčešće psa, mačke, zeca, tvora, lisice, vuka, rakuna, šišmiša itd.

Na početno stanje bolest se očituje pojačanim lučenjem sline i strahom od vode, kao i depresivnim stanjem, koje zamjenjuju napadi agresije i uzbuđenja.

Osobe koje su u opasnosti od razvoja bjesnoće moraju se cijepiti.

Nažalost, pojava simptoma bolesti neizbježno završava smrću, pa liječenje uključuje samo ublažavanje stanja bolesnika.

ruski sinonimi

Bjesnoća, hidrofobija, bjesnoća.

engleski sinonimi

Bjesnoća, hidrofobija, pseće ludilo, Lyssa, Madnessan.

Simptomi

Bjesnoća obično ne uzrokuje simptome sve dok posljednja faza bolesti kod kojih liječenje više nije moguće. Razdoblje inkubacije (od infekcije do pojave simptoma) traje od 7 dana do 1 godine, u prosjeku 20-90 dana. Znakovi bolesti često se pojavljuju nekoliko dana prije smrti pacijenta:

• prije pojave glavnih simptoma, na mjestu ugriza može se pojaviti oteklina, crvenilo, svrbež,
• groznica,
• glavobolja, malaksalost,
• gubitak apetita, mučnina, povraćanje, proljev,
• anksioznost, poremećaji spavanja,
• depresija,
• povećana osjetljivost na slušne, vizualne podražaje,
• depresivno stanje svijesti, tjeskoba, apatija zamjenjuju se napadima uzbuđenja, tjeskobe, agresije. Napadi uzbuđenja popraćeni su ubrzanim disanjem i otkucajima srca,
• poremećaji disanja i gutanja,
• hidrofobija - strah od vode (kada priča o njoj ili pokušava da pije, pacijent doživljava užas, ima bolne grčeve ždrijela i grkljana),
• prekomjerno lučenje sline,
• halucinacije,
• konvulzije,
• djelomična paraliza.

Opće informacije o bolesti

Bjesnoća je opasna virusna bolest koju karakterizira teško oštećenje središnjeg živčanog sustava (mozga i leđne moždine). U početnoj fazi je asimptomatska, simptomi se javljaju u kasnoj fazi, kada liječenje više nije moguće.

Prevalencija bjesnoće ovisi o stupnju cijepljenosti kućnih ljubimaca. Najčešća je u ruralnim područjima i češće se javlja ljeti.

Bjesnoća može zahvatiti sve sisavce i prenosi se tjelesnim tekućinama, uglavnom slinom. Kod ljudi se infekcija bjesnoćom u pravilu javlja kao posljedica ugriza zaražene životinje, kontakta sline zaražene životinje na oštećenu kožu, sluznicu usta, nosa i očiju. Mnogo rjeđe se bjesnoća prenosi konzumacijom zaraženog mesa. Bolest se ne prenosi s osobe na osobu; infekcija transplantacijom organa od zaraženih donora može biti izuzetno rijetka.

Najčešće se osoba zarazi od domaćih životinja - od pasa, mačaka, zečeva, konja, tvorova, rjeđe - od divljih - lisica, rakunski psi, vukovi, rakuni, šišmiši itd. Divlje životinje, pak, zaraze domaće životinje bjesnoćom.

Nakon što virus uđe u tijelo kroz kožu ili sluznicu, živčanim vlaknima dospijeva u leđnu moždinu i mozak, gdje se fiksira i počinje dijeliti. Javlja se encefalitis – upala mozga. To dovodi do povećanja refleksne ekscitabilnosti i razvoja paralize. Tada se virus širi duž živčanih vlakana u suprotnom smjeru, dospijeva u jetru, bubrege, nadbubrežne žlijezde, kožu, srce, žlijezde slinovnice, kostur, uzrokujući poremećaj živčanog sustava i disfunkciju raznih organa.

Brzina širenja virusa ovisi o mjestu ugriza (kod ugriza glave, ruku bit će velika), njegovoj dubini, broju uzročnika koji su ušli u ranu, aktivnosti mikroorganizama i na imunološki status zaražene osobe.

Razdoblje inkubacije bolesti u prosjeku je 20-90 dana, ali može varirati od tjedan dana do jedne godine. Kada se pojave simptomi smrtni ishod obično je neizbježan.

Smrt najčešće nastupa kao posljedica oštećenja dišnog centra, što za sobom povlači zastoj disanja.

Tko je u opasnosti?

• Ugriz domaće ili divlje životinje.
• Stanovnici ruralnih područja koji kod kuće drže životinje koje nisu cijepljene protiv bjesnoće.
• Putnici u zemljama u razvoju (Afrika, jugoistočna Azija).
• Putovanje u prirodu i kontakt s divljim životinjama (lisice, rakuni, šišmiši i dr.)
• Lovci, traperi.
• Zaposlenici zooloških vrtova, vrtića, skloništa za životinje.
• Veterinari.
• Rad s virusom bjesnoće u laboratoriju.

Dijagnostika

Dijagnoza "bjesnoće" pretpostavlja se u prisutnosti simptoma bolesti nakon ugriza životinje i potvrđuje se pregledom uzorka kože sa zatiljka, oslobađanjem virusa iz sline, suzne i cerebrospinalne tekućine.

Laboratorijska istraživanja

• Potpuna krvna slika (bez leukocitarne formule i ESR). Razina leukocita može biti povišena.
• Opća analiza urina. Kod bjesnoće može doći do značajnog povećanja broja leukocita u mokraći u odsutnosti bakterijske upale.
• Test krvi za određivanje antitijela na uzročnika bjesnoće. Tijekom analize, pomoću posebnog imunofluorescentnog bojenja, otkriva se prisutnost u krvi molekula koje proizvodi imunološki sustav kao odgovor na gutanje virusa bjesnoće. Dijagnoza se potvrđuje značajnim (4 ili više puta) povećanjem broja (titra) protutijela na virus bjesnoće u bolesnika koji nisu cijepljeni.

• Određivanje uzročnika bjesnoće u biološkim tekućinama i tjelesnim tkivima.
  • Proučavanje biopsijskih uzoraka (fragmenata tkiva) kože stražnjeg dijela glave, otisaka rožnice. Dobivenom materijalu dodaju se obilježena antitijela (molekule koje se specifično vežu na molekulu virusa bjesnoće). Pod utjecajem ultraljubičastog zračenja, kompleks virusa "zalijepljen" antitijelima daje karakterističan zelenkasti sjaj, što ukazuje na prisutnost virusa bjesnoće u uzetom materijalu. Ova analiza je najpouzdanija tijekom prvog tjedna bolesti.
  • Proučavanje genetskog materijala virusa lančanom reakcijom polimeraze (PCR). Mogu se koristiti slina, krv, cerebrospinalna tekućina, kao i zahvaćena tkiva. Pouzdanost rezultata se približava 100%.
  • Proučavanje moždanog tkiva tijekom elektronske mikroskopije. Uzima se komadić moždanog tkiva (biopsija), koji se zatim podvrgava posebnom bojenju i proučava pod elektronski mikroskop, što vam omogućuje postizanje vrlo visokog stupnja povećanja. Istodobno, u stanicama zahvaćenim virusom bjesnoće živčanog tkiva izoliraju se posebne inkluzije ili se otkrije sam virus.

Ostale metode istraživanja

• Elektroencefalografija (EEG) je metoda kojom se procjenjuju električni potencijali mozga.

Liječenje

Ne postoji specifično liječenje bjesnoće. U pravilu, bolest je neizlječiva i dovodi do smrti.

Kod ugriza divlje životinje provodi se pranje, temeljit pregled strana tijela(npr. slomljeni zubi) i debridman. Zatim se hitno uvode imunoglobulini - posebne stanice imunološki sustav. Zatim se u roku od dva tjedna pacijent cijepi (koristi se ukupno 5 cjepiva). To je jedini način da se spriječi bolest.

Nakon ugriza kućnog ljubimca potrebno je promatrati otprilike 10 dana, a ako se pojave simptomi bjesnoće, odmah se obratiti liječniku radi poduzimanja mjera imunizacije bolesnika. Izvor bjesnoće - bolesna životinja - mora se izolirati.

Liječenje bjesnoće usmjereno je na ublažavanje simptoma - ublažavanje napadaja, smanjenje boli. Za to se koriste antikonvulzivi, analgetici, sedativi.

Kako bi se smanjio kontakt s potencijalnim nadražujućim tvarima, pacijent se stavlja u posebnu sobu.

Nadoknađuje gubitak tekućine minerali; održanog umjetna ventilacija pluća.

Prevencija

• Osobe koje su u opasnosti od razvoja bjesnoće svakako se trebaju cijepiti.
• Nakon ugriza divlje životinje, temeljito operite ranu sapunom i vodom i odmah potražite liječničku pomoć radi imunizacije i cijepljenja protiv bjesnoće.
• Preventivno cijepljenje kućnih ljubimaca.
• Kućne ljubimce treba držati kod kuće i nadzirati kada su vani. Za to se mogu koristiti kavezi i zatvoreni boksovi. To će pomoći u izbjegavanju infekcije domaćih životinja od divljih. Treba dati Posebna pažnja zečevi, zamorci, hrčke i druge male kućne ljubimce jer se ne mogu cijepiti protiv bjesnoće. Često se kućni ljubimac zarazi izvan grada, gdje ima priliku kontaktirati s divljim, na primjer, mačke, psi mogu pobjeći u šumu i doći u kontakt sa zaraženim glodavcima, lisicama.
• Pri susretu s lutalicama treba se pridržavati pravila komunikacije - ne dirati ih, ne maziti ih kako ne bi bili ugrizeni.
• Izbjegavajte kontakt s divljim životinjama (npr. lisice, rakuni). Zdrave divlje životinje same izbjegavaju ljude, pa bi zvijer koja se ne boji ljudi i ne pokušava pobjeći trebala izazvati sumnju.
• Ugriz kućnog ljubimca također može biti razlog za odlazak liječniku, primjerice, ako ne znate može li biti zaražen bjesnoćom, a još više ako je životinja uginula u roku od nekoliko dana nakon ugriza.

• Opća analiza krvi
• Opća analiza urina

Književnost

• Dan L. Longo, Dennis L. Kasper, J. Larry Jameson, Anthony S. Fauci, Harrisonova načela interne medicine (18. izdanje), New York: McGraw-Hill Medical Publishing Division, 2011.
• Manning SE, Rupprecht CE, Fishbein D, et al. Prevencija bjesnoće kod ljudi - Sjedinjene Države, 2008.: preporuke Savjetodavnog odbora za praksu cijepljenja. MMWR Recomm Rep. 23. svibnja 2008; 57: 1-28.
• Hemachudha T. Ljudska bjesnoća: klinički aspekti, patogeneza i potencijalna terapija. Curr Top Microbiol Immunol. 1994;187:121-43.
• Gerald L. Mandell. Mandell, Douglas i Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases: Expert Consult Premium Edition. Churchill Livingstone, 2009.