Analiza razmaza periferne krvi. Bris periferne krvi: nedostaju normokromni eritrociti normalne veličine, shistociti, degmaciti (“ugrizene” stanice) ili sferociti. Brzina sedimentacije eritrocita

Krv je tekućina složenog sastava - plazma, u kojoj su suspendirani oblikovani elementi: eritrociti (Red Blood Cells, RBCs - crvene krvne stanice), leukociti (White Blood Cells, WBCs - bijele krvne stanice) i trombociti (Platelets, Plt). Prilikom zgrušavanja krvi, nakon odvajanja ugruška, ostaje tekućina koja se naziva serum.Periferna krv normalno sadrži zrele stanične elemente. Nezreli prekursori nalaze se u hematopoetskom organu - crvenoj koštanoj srži.

Od metoda kvantitativnih i kvalitativnih istraživanja oblikovani elementi krvi, najčešća opća klinička pretraga krvi: određivanje koncentracije hemoglobina, indeksa boje, sadržaja eritrocita, leukocita, leukocitarna formula, opis značajki morfološke slike krvnih stanica, procjena brzine sedimentacije eritrocita (ESR). Ako postoje promjene u ovim pokazateljima, dodatno se određuje broj retikulocita i trombocita. Ove se studije provode za sve bolesnike. Na ambulantnoj osnovi često su ograničeni na nedovoljno informativno određivanje količine hemoglobina, leukocita i ESR (tzv. "trojka"). Klinička analiza periferne krvi jedna je od najvažnijih laboratorijskih pretraga i ponekad daje mogućnost da se odmah odredi smjer dijagnostička pretraga(na primjer, s pojavom blasta u formuli krvi ili prisutnošću hiperleukocitoze s apsolutnom limfocitozom, Gumprechtove sjene). Na temelju kliničke pretrage krvi teško je suditi o hematopoezi općenito. Potpuniju sliku daje paralelna studija koštana srž(citološki, citokemijski i citogenetski).

U patološkim stanjima hematološke promjene variraju ovisno o težini procesa, stadiju bolesti te prisutnosti komplikacija, komorbiditeta i terapije. Mora se uzeti u obzir da promjene laboratorijski pokazatelji(na primjer, promjena u broju leukocita i krvnoj slici) opažaju se ne samo u patološkim stanjima, već i tijekom određenih dijagnostičke procedure, promjene u fiziološkom statusu organizma (klimatske promjene, doba dana, dob, psihička vježba, hormonalne razine).

Prikupljanje i obrada krvi

Istraživanje se preporučuje provesti ujutro na prazan želudac ili 1 sat nakon laganog doručka. Pregledajte uglavnom kapilarnu krv, možete koristiti vensku krv (također uzeta natašte). Ne preporuča se vađenje krvi nakon tjelesnog i psihičkog stresa, uzimanja lijekova, osobito intravenozno ili intramuskularno, izlaganja rendgenskom zračenju i nakon fizioterapijskih postupaka. U hitnim slučajevima ova pravila se zanemaruju.

Hemoglobin (Hb)

Hemoglobin je glavni respiratorni pigment i glavna komponenta eritrocita, povezan s kromoproteinima i obavlja važnu funkciju prijenosa kisika iz pluća u tkiva te prijenosa ugljičnog dioksida i protona iz tkiva u pluća. Također igra bitnu ulogu u održavanju acidobazne ravnoteže krvi. Puferski sustav koji stvara Hb pomaže u održavanju pH krvi unutar određenih granica.

Hemoglobini su tetramerni proteini čije molekule nastaju različite vrste polipeptidnih lanaca. Molekula se sastoji od dva lanca od dva različiti tipovi. Polipeptidni lanac svake podjedinice hemoglobina posebno je presavijen oko velikog ravnog hemskog prstena koji sadrži željezo - spoj protoporfirina IX sa željezom. Hem daje hemoglobinu karakterističnu boju.

Svojstva pojedinih hemoglobina neraskidivo su povezana s njihovom kvarternom i sekundarnom i tercijarnom strukturom. Najčešći hemoglobini imaju sljedeću tetramernu strukturu: HbA (normalan odrasli hemoglobin) a 2 b 2 ; HbF (fetalni hemoglobin) - a 2 g 2; HbS ((hemoglobin u anemiji srpastih stanica) - a 2 s 2; HbA 2 (manji hemoglobin odrasle osobe) - a 2 d 2. Kvartarna struktura doprinosi izvedbi hemoglobina svojom jedinstvenom biološkom funkcijom i pruža mogućnost stroge reguliranje njegovih svojstava.

Normalne vrijednosti. U zdravih osoba koncentracija hemoglobina u krvi je: muškarci 132-164 g / l

žene 115-145 g/l

Dnevne fluktuacije. Vrijednosti hemoglobina su minimalne ujutro, a maksimalne navečer. Značajna promjena smatra se da je hemoglobin 15 g/l ili više.

Klinički značaj

Smanjeni sadržaj hemoglobina u krvi ispod norme za određeni spol i dob naziva se anemija. Prema kriterijima SZO, anemija kao klinički sindrom određuje se smanjenjem koncentracije hemoglobina u perifernoj krvi ispod 110 g / l za bilo koju dob i spol.

Treba imati na umu da se dijagnoza anemije ne može postaviti samo na temelju određivanja koncentracije hemoglobina u krvi. Ova studija utvrđuje samo prisutnost anemije. Da bi se razjasnila njegova priroda, potrebno je odrediti broj eritrocita, indeks boje, proučiti morfologiju eritrocita i druge pokazatelje.

Eritrociti (RBC - crvene krvne stanice - crvene krvne stanice)

eritrociti - najbrojniji oblikovani elementi krvi čiji je glavni sadržaj hemoglobin. Zreli eritrociti su stanice bez jezgre bikonkavnog oblika diska. Plosnati disk najbolje je prilagođen za transport tvari iz stanice iu nju, kao i za difuziju plinova u središte stanice. Površina diska je 1,7 puta veća od površine kugle koja odgovara volumenu i može se umjereno mijenjati bez rastezanja stanične membrane. Bikonkavni oblik, elastičnost, deformabilnost i očuvanje stanične strukture nakon uklanjanja hemoglobina iz nje ovise o strukturnim značajkama eritrocita, prvenstveno o njegovom citoskeletu. Citoskelet eritrocita razlikuje se od citoskeleta nuklearnih stanica. Eritrociti imaju samo površinski citoskelet, koji je kombinacija proteina otporna na deterdžent međusobno i s membranom, tvoreći neku vrstu mreže duž unutarnja površina plazma membrana okrenuta prema citoplazmi. Ovaj citoskelet se još naziva i membranski kostur, jer. čini ga jačim i osigurava jedinstvo s lipidnim slojem, daje unutarnju pokretljivost i fleksibilnost.

Citoskelet eritrocita ima važnu ulogu u njegovoj sposobnosti da se deformira. Diskoidni eritrocit može lako proći kroz filter mikropora od 3 µm, kroz zid sinusa slezene.

U eritrocitima se odvijaju mnoge enzimske reakcije. Adsorbiraju aminokiseline, lipide, toksine. Zbog sadržaja hemoglobina u njima, uključeni su u regulaciju acidobazne ravnoteže. Budući da je membrana eritrocita propusna za anione i nepropusna za katione i hemoglobin, oni sudjeluju u regulaciji ionskog sastava plazme. Osim toga, eritrociti imaju antigenska svojstva, no njihova je glavna uloga opskrba tkiva kisikom i sudjelovanje u transportu ugljičnog dioksida.

klinički značaj.

odbiti broj eritrocita (eritrocitopenija) jedan je od glavnih kriterija za anemični sindrom. Od prave anemije potrebno je razlikovati hidremiju povezanu s povećanjem volumena plazme zbog priljeva tkivne tekućine (na primjer, kada se edem konvergira). Uzroci anemije su gubitak krvi, hematopoetski poremećaji u koštanoj srži (nedostatak željeza, folna kiselina, vitamin B 12 , aplastični procesi) i povećana hemoliza. Stupanj eritrocitopenije također varira u teškim slučajevima (aplastična anemija, hemolitička anemija tijekom krize, B 12 -deficijentna anemija) može doseći 1x10 12 /l ili manje. Osim toga, smanjenje broja crvenih krvnih stanica javlja se kod leukemije, multiplog mijeloma, ne-Hodgkinovih limfoma, sistemskog eritemskog lupusa, reumatoidni artritis, metastaze malignih tumora itd. Smanjenje broja eritrocita također se opaža s nedovoljnim sadržajem proteina u hrani, gladovanju i vegetarijanskoj prehrani.

Povećati Broj crvenih krvnih stanica po jedinici volumena krvi naziva se poliglobulija ili eritrocitoza. U fiziološkim uvjetima opaža se u novorođenčadi u prva 3 dana života (privremeno zgušnjavanje krvi kao posljedica gubitka tekućine tijelom s naglim prijelazom na plućno disanje i disanje kože), kod odraslih s pojačanim znojenjem, gladovanjem . Kod penjanja na veliku visinu eritrocitoza nije posljedica zgušnjavanja krvi, već stvarnog povećanja proizvodnje eritrocita zbog hipoksije. Eritrocitoza promatrana u patološkim stanjima kao simptomi niza bolesti (sekundarna eritrocitoza). Sekundarna simptomatska eritrocitoza dijeli se na apsolutnu i relativnu. Uzrok apsolutne poliglobulije je reaktivno povećanje eritropoeze s povećanjem mase cirkulirajućih crvenih krvnih stanica (s prirođenim srčanim defektima, kroničnim opstruktivnim bronhitisom, hipernefroidnim karcinomom, cerebelarnim hemangioblastomom itd.). U osnovi relativne poliglobulije je zgušnjavanje krvi bez povećanja broja eritrocita kao rezultat smanjenja volumena plazme tijekom dugotrajnog povraćanja, proljeva i opeklina.

Od simptomatske eritrocitoze treba razlikovati krvne bolesti povezane s hemoblastozom (polycythemia vera).

Promjene u veličini crvenih krvnih stanica

mikrocitoza- prevlast u krvnim razmazima eritrocita malog promjera (5,0-6,5 mikrona). Ovaj simptom se opaža kod nasljedne sferocitoze, anemije nedostatka željeza, talasemije itd. Ove stanice imaju smanjeni volumen i količinu hemoglobina. Glavni čimbenik je kršenje sinteze hemoglobina, što je tipično za anemiju nedostatka željeza, kao i neke hemoglobinopatije.

Šistociti - sitni fragmenti eritrocita, odnosno degenerativno promijenjene stanice nepravilnog oblika promjera 2,0-3,0 mikrona. Nalaze se na razmazima krvi kod mikroangiopatskih hemolitička anemija, vaskulitis, glomerulonefritis, uremija, marširajuća hemoglobinurija, hemoglobinopatije, DIC, mijelodisplastični sindrom i druge bolesti.

makrocitoza - prisutnost eritrocita promjera >9,0 µm u krvnim razmazima. Ovaj simptom se otkriva u novorođenčadi kao fiziološka značajka, kao i kod odraslih s makrocitnom anemijom, bolestima jetre, nedostatkom vitamina B 12 i folne kiseline, s anemijom u trudnica, u bolesnika s malignim tumorima, s smanjenom funkcijom. Štitnjača, mijeloproliferativne bolesti.

Megalocitoza - pojava u krvnim razmazima eritrocita promjera 11,0-12,0 mikrona, hiperkromna, bez prosvjetljenja u sredini, ovalna. Nalaze se kod anemije uzrokovane nedostatkom vitamina B 12 i folne kiseline, kod anemije trudnica, helmintičke invazije, dizeritropoeze.

Anizocitoza - prisutnost u krvnim razmazima eritrocita koji se razlikuju po veličini: s prevlašću eritrocita malog promjera - mikroanizocitoza, s prevlašću velikih eritrocita - makroanizocitoza. Anizocitoza se vidi kod anemije uzrokovane nedostatkom željeza kao kod početno razdoblje bolesti, te kao posljedica terapije željezom, uslijed čega se u krvi pojavljuju eritrociti bogati hemoglobinom, nastali prilikom obnove razine željeza u krvi, dok cirkuliraju mali eritrociti nastali prije početka liječenja. Anizocitoza se javlja kod bolesti koje karakterizira prisutnost normalnog i patološki promijenjenog bazena eritrocita. Dakle, kod hipoplastične anemije, paroksizmalne noćne hemoglobinurije, mijeloproliferativnih bolesti, talasemije, prisutni su i mikrociti i normociti, kao i makrociti. Anizocitoza je karakteristična za većinu anemija različitih vrsta.

Promjene u obliku crvenih krvnih stanica

Promjene u obliku crvenih krvnih stanica različitim stupnjevima izražajnost (poikilocitoza) može se uočiti u gotovo svakoj anemiji, bez obzira na njezinu genezu. Normalno, mali dio stanica također može imati oblik koji se razlikuje od diskoidnog.

Samo nekoliko vrsta eritrocita specifično je karakteristično za određene patologije. to nasljedne bolesti: nasljedna sferocitoza - Minkowski-Choffardova bolest (mikrosferociti) i anemija srpastih stanica (srpaste stanice). Drugi oblici mogu se pojaviti u različitim patološkim stanjima. Ovdje je važno razlikovati reverzibilne oblike (ehinociti i stomatociti), koji se još uvijek mogu vratiti u normalne, i nepovratno izmijenjene oblike (akantociti, kodociti - ciljne stanice, sferociti, nepovratno promijenjeni stomatociti).

Ehinociti - kuglaste stanice, na čijoj je površini dosta pravilno smješteno 30-50 spikula. Istodobno, omjer površine i volumena ostaje normalan. Diskocitno-ehinocitna transformacija u početno stanje reverzibilan, a pokazalo se da se spikule ponovno pojavljuju na površini stanice svaki put na istom mjestu. Blizina staklene površine često uzrokuje stvaranje ehinocita. Vjeruje se da je ovaj učinak povezan s lokalnom alkalizacijom medija pH > 9,0. Promjena pH iz neutralnog u alkalni i natrag uzrokuje reverzibilni prijelaz diskocita u sferocite i obrnuto.

Kada se eritrociti suspendiraju u izotoničnom mediju, često dolazi do stvaranja ehinocita. Dodatak albumina može vratiti stanice u njihov normalan diskocitni oblik. Ehinociti se nalaze in vivo, obično u slučajevima kada je sadržaj ATP-a nizak u stanicama ili je poremećen sastav masnih kiselina u plazmi. Ako stanica dugo ostane u stanju ehinocita, dolazi do procesa gubitka lipidne komponente membrane, a promjene oblika postaju nepovratne. Ehinociti se često pojavljuju kao artefakt, mogu se pojaviti u uremiji zajedno s akantocitima, nasljednim nedostatkom piruvat kinaze, fosfoglicerat kinaze.

Stomatociti (ili hidrociti) imaju povećani volumen i površinu za 20--30%, prorezni oblik središnjeg lumena (pelor). Ove stanice nastaju pod utjecajem vrlo različitih čimbenika: niskog pH, neprodornih aniona, kationskih deterdženata, klorpromazina, vinblastina, vitamina A.

srpastih stanica- karakteristični za anemiju srpastih stanica i druge hemoglobinopatije, sadrže hemoglobin S, koji može polimerizirati i deformirati membranu, osobito s niskim sadržajem kisika u krvi. Na tome se temelji "test s podvezom", kada se, da bi se povećao sadržaj ovih stanica u preparatu, prije uzimanja krvi pacijentu na prst stavi podveza koja izaziva lokalnu hipoksiju.

Ciljne stanice (kodociti) imaju povećanu površinu zbog viška kolesterola. Imaju obojanu periferiju i malo tamnije kuglasto područje na pozadini svijetlog središnjeg dijela. Ovi oblici su karakteristični za a- i b-talasemiju, hemoglobinopatije C i S, intoksikaciju olovom i bolesti jetre, osobito dugotrajnu opstruktivnu žuticu. Kodociti su osobito česti kod opstruktivne žutice (po Bessisu do 75%).

akantociti(površina stanice ima nazubljen oblik), za razliku od ehinocita, ne mogu se vratiti u normalu kada se stave u svježu plazmu. slične stanice sferoidni (nemaju pelor), imaju od 3 do 12 spikula s batičastim nastavcima na krajevima. Duljina i debljina spikula jako varira. Volumen, površina, sadržaj hemoglobina obično su normalni. Akantocite nalazimo kod teških oblika hemolitičke anemije, bolesti jetre, nasljedne abetalipoproteinemije, nasljednog nedostatka piruvat kinaze, nasljedne sferocitoze (teški oblici). U bolesnika nakon splenektomije može se uočiti mali broj akantocita.

Suzne stanice (dakriociti) za razliku od akantocita, imaju jednu veliku spikulu i često sadrže inkluziju – Heinzovo tijelo; obično su mikrociti. Ove se stanice osobito često otkrivaju u mijelofibrozi, rjeđe u razne forme ah anemija.

stomatociti opaža se kod nasljedne stomatocitoze. Razlog njihove pojave je povećana propusnost membrane za natrij i kalij. Nakon što kompenzacijsko povećanje transporta iona više nije učinkovito, citoplazma se obogaćuje natrijem, gubi kalij i postaje hidratizirana. Ciljne stanice također imaju povećanu koncentraciju natrija i smanjenu koncentraciju kalija. Veliki volumen stomatocita ne sprječava ga da dovoljno dugo preživi u mikrocirkulaciji. U manjem broju (oko 3% ukupne stanične populacije) stomatocite nalazimo kod opstruktivnih bolesti jetre, alkoholna ciroza, kardiovaskularna patologija, maligni tumori. Stomatocite je moguće identificirati kao artefakte.

kserociti- guste, nepravilnog oblika, dehidrirane stanice koje su karakteristične za nasljedna bolest- obiteljska kserocitoza. U fiziološkom smislu te su stanice suprotne stomatocitima i nastaju gubitkom kationa, a time i vode. Međutim, kserocit ponekad oblikom nalikuje stomatocitu (ali sa zbijenom, dehidriranom citoplazmom).

mikrosferociti- specifične stanice za nasljednu mikrosferocitozu. Promjena spektrina dovodi do poremećaja stabilnosti membrane. Njihova identifikacija na razmazima krvi ponekad zahtijeva veliku pažnju. Karakteristično je da mikrosferociti u razmazu izgledaju kao homogeni, bez značajne poikilocitoze, njihov broj je od 1-3 do 20-30 po vidnom polju (ostale stanice su normalne, ukupno ima 50 stanica u polju). pogled). Ako je populacija mikrosferocita heterogena, to je tipičnije za hemolitičku anemiju. Mikrosferocitoza otkrivena na preparatima, koja je u kombinaciji s anizocitozom i poikilocitozom, također može ukazivati ​​na mehaničko oštećenje eritrocita (sindrom fragmentacije eritrocita), opeklinsku bolest, nedostatak glukoza-6-fosfat dehidrogenaze. Sferocitoza se može smatrati terminalnim, prehemolitičkim stadijem, u koji prelaze ehinociti, akantociti i stomatociti u slučaju ireverzibilnog oštećenja.

Eliptociti normalno čine manje od 1% svih stanica. S raznim anemijama (talasemija, nedostatak željeza i posebno megaloblastična anemija), njihov sadržaj doseže 10%. U isto vrijeme, populacija eliptocita je heterogena u veličini. Ako su eliptociti homogeni i čine više od 25%, onda je to karakterističnije za nasljednu eliptocitozu.

Degmaciti (ugrizene stanice)često sadrže Heinzova tjelešca i opažaju se kod hemolitičke anemije uzrokovane trovanjem oksidansima. U vrlo teškim slučajevima trovanja na preparatima se može uočiti penumbra eritrocita (ekcentrocita).

Šistociti (kacige i trokutaste stanice) uočena u mikroangiopatiji, hemolitičkoj anemiji pod utjecajem fizičkih čimbenika, malignoj hipertenziji, uremiji, kao iu slučajevima komplikacija u protetici krvnih žila i zalistaka.

RBC indeksi

Pokazatelji MCV (srednji korpuskularni volumen, srednji volumen eritrocita, srednji korpuskularni volumen), MCH (srednji korpuskularni hemoglobin, srednji sadržaj hemoglobina u eritrocitu), MCHC (srednja korpuskularna koncentracija hemoglobina, srednja korpuskularna koncentracija hemoglobina), kao i metode. za njihov izračun uvedeni su u 1929 Wintrobe (1993).

Srednji volumen eritrocita (MCV) izračunava se dijeljenjem vrijednosti hematokrita od 1 mm 3 krvi s brojem crvenih krvnih stanica u 1 mm 3 prema formuli:

MCV \u003d HEMATOKRIT 1 mm 3 / BROJ ERITROCITA U 1 mm 3

Rezultat se izražava u kubnim mikronima (µm 3) ili fentolitrima (fl). U praksi se prosječni volumen eritrocita izračunava množenjem hematokrita (%) s 10 i dijeljenjem dobivenog umnoška s brojem eritrocita u milijunima po kubnom milimetru krvi:

MCV \u003d HEMATOKRIT (%) x10 / BROJ ERITROCITA (milijun stanica / mm 3)

Prosječna vrijednost hemoglobina eritrocita (MCH) postavlja se prema formuli:

MCH=HEMOGLOBIN(g/100ml)x10/BROJ CRVENIH STANICA (milijun/µl)

Rezultat se izražava u pikogramima (pg), norma je 27-31 pg. Ovaj pokazatelj karakterizira prosječni sadržaj hemoglobina u jednom eritrocitu. Sličan je indikatoru boje koji je uključen u kompletnu krvnu sliku i široko se koristi u klinici. Na temelju ovih pokazatelja anemije se dijele na normo-, hipo- i hiperkromne.

Prosječna koncentracija hemoglobina u eritrocitima (MCHC) izračunava se dijeljenjem koncentracije hemoglobina u g/100 ml s hematokritom i množenjem sa 100:

MCHC \u003d HEMOGLOBIN (g / dl) / HEMATOKRIT (%) x 100

Ovaj indeks se izražava u g/dl. Razlike između posljednja dva indeksa trebale bi biti jasne. Prvi pokazatelj označava masu hemoglobina u prosječnom eritrocitu i izražava se u dijelovima grama (pikogramima). Drugi indeks pokazuje koncentraciju hemoglobina u prosječnom eritrocitu, tj. omjer sadržaja hemoglobina i volumena stanice. Odražava zasićenost eritrocita hemoglobinom i normalno iznosi 30-37 g/dl. Za razliku od srednjeg sadržaja hemoglobina u eritrocitu (MCH), MCHC ne ovisi o prosječnom volumenu stanica i osjetljiv je test za kršenje procesa stvaranja hemoglobina. Informativnost ICSU na anemija uzrokovana nedostatkom željeza iznosi 85% (Zolotnitskaya R.P., 1982).

Kod normokromne anemije, povećanje ili smanjenje prosječne veličine eritrocita povezano je s odgovarajućim povećanjem ili smanjenjem mase hemoglobina sadržanog u stanici, prosječna koncentracija hemoglobina (MCHC) ostaje normalna. Kod hipokromne anemije smanjenje prosječnog sadržaja hemoglobina u eritrocitu je značajnije od smanjenja prosječnog volumena stanica. Stoga je MCHC ispod normalnog.

S izuzetkom nasljedne mikrosferocitoze, u nekim slučajevima anemije srpastih stanica i hemoglobinoze C, MCHC ne prelazi 37%. Stoga je ograničena hiperkromija vrlo rijetka. Vrijednost od 37% praktički je gornja granica zasićenosti eritrocita hemoglobinom, a daljnjim povećanjem koncentracije može doći do kristalizacije.

Pokazatelj MCV je najinformativniji za proučavanje i dijagnozu anemije. MCH i MCHC nose manje kliničkih informacija. Odnos indeksa eritrocita izražava se formulom:

MCH (pg)=MCHC(g/l)xMCV(fl)/1000

Moderni hematološki strojevi dobivaju vrijednosti MCH i MCHC izračunom prema programu ugrađenom u procesor. U nedostatku automata, prikladno je izračunati indekse eritrocita pomoću Masonovog nomograma.

Indikator u boji

(CPU)- relativna vrijednost koja karakterizira prosječni sadržaj hemoglobina u eritrocitu. Formula za izračunavanje indeksa boje je:

CP=HEMOGLOBIN (g/l)x3 / prve 3 znamenke broja eritrocita

Normalni CPU je 0.86-1.05. Ovaj pokazatelj ima isto kliničko tumačenje kao i prosječni sadržaj hemoglobina u eritrocitu. Međutim, indeks boja definiran je u konvencionalne jedinice, pa ima apstraktno značenje.

Indeks anizocitoze (RDW) karakterizira heterogenost veličine eritrocita puno točnije nego što se može dobiti vizualnom procjenom krvnog razmaza, mjerenjem prosječnog promjera eritrocita i konstrukcijom Price-Jonesove krivulje. Procjena stupnja anizocitoze pod mikroskopom popraćena je nizom pogrešaka. Kada se eritrociti osuše, njihov promjer se smanjuje za 10-20%, u debelim razmazima manji je nego u tankim. Za razliku od morfoloških metoda za procjenu anizocitoze, automatizirani konduktometrijski proračun ima veću točnost i ponovljivost rezultata.

stol 1

Slične informacije.

Mikroskopija krvnog razmaza

Mikroskopija krvnog razmaza je istraživanje pod mikroskopom preparata pripremljenog iz kapi krvi.

Provođenje mikroskopije krvnog razmaza neobavezan je dio kompletne krvne slike ili broja leukocita i ne provodi se zasebno.

ruski sinonimi

Mikroskopski pregled krvnog razmaza, krvni razmaz, mikroskopija krvi, ručno brojanje leukocita, periferni krvni razmaz.

SinonimiEngleski

Razmaz krvi, periferni razmaz, ručni diferencijal, morfologija crvenih krvnih stanica, morfologija bijelih krvnih stanica, periferni razmaz krvi, pregled krvnog filma, krvni film

Koji se biomaterijal može koristiti za istraživanje?

Venska ili kapilarna krv.

Opće informacije o studiju

Studija vam omogućuje morfološku procjenu stanica (oblikovanih elemenata) krvi, kao i njihovo brojanje. Krvne stanice nastaju i sazrijevaju u crvenoj koštanoj srži, a zatim se otpuštaju u opću cirkulaciju. Svaka vrsta stanica ima svoju funkciju. U fiziološkim uvjetima broj i morfološka svojstva krvnih stanica su stabilni i ne prelaze referentne vrijednosti. U različitim bolestima, količina i svojstva (oblik, volumen, boja, prisutnost inkluzija, njihov broj itd.) Prirodno se mijenjaju. Zbog toga je procjena staničnih elemenata u krvnom razmazu univerzalni test u dijagnostici mnogih patološka stanja i naširoko se koristi u praksi liječnika gotovo svih specijalizacija.

Razmaz periferne krvi je "snimka" krvnih stanica onakvima kakve jesu u trenutku uzimanja uzorka. Za izvođenje studije, venska ili kapilarna krv se stavlja na staklo, koje se mora pažljivo odmastiti. Zatim se drugo staklo stavi na predmetno staklo pod kutom od 45" i povuče po kapi krvi tako da se u tankom sloju razlije po širini brušenog stakla. Zatim se razmaz fiksira kako bi krvne stanice bile stabilnije Nakon toga, bris se boji posebnom bojom koja čini stanice i njihove elemente svjetlijima i sušima.Nakon toga liječnik u laboratoriju pregledava bris pod mikroskopom.

Za što se koriste istraživanja?

Sve dok se nisu pojavili automatski analizatori, prilikom svake kompletne krvne slike radio se mikroskopski pregled krvnog razmaza, jer nije bilo moguće na drugi način odrediti postotak različitih oblika leukocita (leukocitarnu formulu). U modernim analizatorima izračun formule leukocita provodi se automatski. Međutim, ako se sumnja na prisutnost patoloških krvnih stanica, mikroskopiranje krvnog razmaza od strane iskusnog liječnika ipak je najbolji način detekcija i evaluacija atipičnih i nezrelih stanica.

Kada je studija zakazana?

Postoji prilično širok raspon bolesti i poremećaja kod kojih se svojstva stanica koje cirkuliraju u krvotoku mogu promijeniti. U normalnim okolnostima iz koštane srži u krv ulaze samo zrele stanice, ali kod niza bolesti, poput leukemije, nezrele stanice, blasti mogu dospjeti u krv. U nekim stanjima, kao što je masivna infekcija, mogu se pojaviti karakteristične nečistoće u leukocitima, a same stanice mogu postati atipične, kao kod infektivna mononukleoza. Otkrivanje u razmazu patoloških stanica u u velikom broju omogućuje vam da sumnjate na bolest koja ih je uzrokovala i propisuje dodatni pregled.

Krvni razmaz može se rutinski davati pacijentima s onkološke bolesti koštane srži, limfnih čvorova za praćenje dinamike stanja i kontrolu učinkovitosti liječenja.

Što znače rezultati?

Referentne vrijednosti

Neutrofili - štap.: 0 - 5 %.

Neutrofili – segment.

Limfociti, %

Monociti, %

Dob	Referentne vrijednosti
Više od 2 godine

CBC znači brojanje broja stanica u uzorku venske krvi. Kapilarna krv nije preporučeni medij za testiranje za brojanje stanica, međutim testiranje hemograma često se izvodi iz uzorka kapilarne krvi u jedinicama intenzivne njege.

Određivanje leukocitne formule, proučavanje prosječne veličine eritrocita, trombocita, određivanje broja prekursora eritrocita (retikulocita) i njihovog stupnja zrelosti, procjena brzine sedimentacije eritrocita itd., Sve je to uključeno u koncept " klinički test krvi".

Klinička pretraga krvi radi se kao prva studija probira kada bolesnik kontaktira i požali se na malaksalost. Može se napraviti skraćena klinička pretraga krvi, takozvana "trojka" - brojanje broja eritrocita, leukocita i određivanje sedimentacije eritrocita (ESR). Skraćeni klinički test krvi je neinformativan, jer može karakterizirati samo izražene patološke procese.

Preporučljivije je iz istog volumena uzorka krvi napraviti detaljan hemogram: brojanje crvenih krvnih stanica s procjenom njihove prosječne veličine (MCV), brojanje ukupnog broja leukocita i procjena leukocitarne formule (brojenje neutrofila). , bazofili, eozinofili, monociti, limfociti), brojanje trombocita i procjena prosječne veličine trombocita (MPV), retikulociti i njihova prosječna veličina (MRV), stupanj zrelosti retikulocita (IRF).

Brojne karakteristike stanica sada se mogu automatski dobiti unutar 3-5 minuta nakon uzorkovanja krvi. Na temelju detaljnog proučavanja hemograma ne samo da se može zaključiti o prisutnosti upalne reakcije, anemije, već io prirodi drugih patoloških procesa, mogući preneseni ili tekući gubitak krvi, nedostatak ne samo željeza, već i vitamina B12, folne kiseline.

Indikacije za istraživanje

• Probirni pregled tijekom preventivnog pregleda, klinički pregled;
• početni pregled tijekom hospitalizacije;
• dijagnoza anemije;
• dijagnoza bolesti hematopoetskog sustava;
• zarazne bolesti;
• upalni procesi;
• hemato-onkološke bolesti;
• praćenje učinkovitosti terapije.

Način istraživanja

Metoda istraživanja ovisi o potrebnim parametrima hemograma.

NA ručni mod, iz uzorka krvi (3-5 ml) dio se uzima u kapilaru za određivanje ESR, dio uzorka krvi se koristi za određivanje hemoglobina, kap krvi se koristi za pripremu brisa i daljnje izračunavanje leukocitarna formula. Posebna količina krvi potrebna je za izradu brisa i određivanje broja trombocita, a dio uzorka krvi potreban je za određivanje broja crvenih krvnih stanica i posebno retikulocita. U ručnom načinu rada, ako je potrebno bojanje i vizualna procjena razmaza, rezultat detaljnog hemograma pacijenta u višekrevetnoj bolnici može se dobiti na kraju radnog dana ili kasnije.

U uvjetima automatskog brojanja stanica i procjene različitih populacija potrebno je 150 do 300 µl krvi i 100 µl za određivanje ESR-a. Proučavanje u automatskom načinu rada temelji se na metodi impedancije Coultera (1956.), koja se temelji na principu zatvaranja električnog kruga tako što svaka ćelija uzastopno prolazi kroz otvor uzorkivača. Nakon toga, metoda automatiziranog brojanja dobila je niz poboljšanja; u modernim analizatorima svaka se stanica procjenjuje prema nekoliko parametara: vodljivost, raspršenje svjetlosti, veličina, prisutnost CD markera na površini, odnosno pripadnost različitim populacijama. Broj parametara određen je modelom uređaja.

Studija u automatskom načinu rada omogućuje vam prepoznavanje patoloških uzoraka koje treba vizualno pregledati stručnjak za laboratorijsku dijagnostiku. Vizualna kontrola hemograma uključuje pripremu krvnog razmaza, stakalca, koji se može izvesti iz kapi krvi već uzetog uzorka, kako u ručnom tako iu automatskom načinu rada. Poželjna je automatizirana priprema razmaza krvi postoji jednolika raspodjela kapi krvi i standardizirano bojenje. Vizualna mikroskopija razmaza se izvodi u pet vidnih polja.

Test krvi u automatskom načinu rada traje 3-5 minuta, ako nije potrebna dodatna priprema razmaza i studija ESR.

Uzimanje uzoraka i uvjeti čuvanja

Klinička analiza krvi provodi se iz venske krvi stabilizirane kalijevom soli EDTA, osim ako nije drugačije navedeno u uputama za analizator. Vađenje krvi se vrši natašte. Uzorak krvi treba promiješati odmah nakon uzimanja 9 puta blagim preokretanjem, treba izbjegavati stvaranje pjene i snažno mućkanje. Prije testiranja, uzorak krvi može se čuvati na sobnoj temperaturi (23-24°C) 24 sata u stalku, u uspravnom položaju, daleko od svjetlosti.

Kada se za kliničku analizu koristi uzorak kapilarne krvi, slobodno tekuće kapi kapilarne krvi moraju se uzeti s prethodno zagrijanog mjesta uboda. Sakupljanje kapilarne krvi bez stiskanja prsta osigurava sigurnost stanica. Pritisak na mjesto uboda i uzimanje uzorka s ohlađenog ekstremiteta će iskriviti rezultate hemograma. Uzorci kapilarne krvi moraju se stabilizirati s kalijevom EDTA, tako da se kapilare obrađene K3EDTA-om trebaju koristiti za prikupljanje uzoraka. Uzorci se mogu čuvati na sobnoj temperaturi (23-24°C) 24 sata u stalku, uspravno, daleko od svjetlosti.

Bolesnici s krvnim bolestima dolaze liječniku kada se pojave određeni simptomi koji izravno ukazuju na krvnu patologiju ili traže tegobe koje su zapravo uzrokovane hematološkim problemima. Na primjer, pacijent se žali liječniku na nedostatak zraka, i kada laboratorijska istraživanja pronađena niska. To može biti manifestacija kardiovaskularne patologije, ali takva anemija zahtijeva obveznu identifikaciju njezine etiologije (moguće gastrointestinalno krvarenje od peptičkog ulkusa ili karcinoma debelog crijeva). Stoga bi anemija (kao i većina drugih hematoloških problema) trebala poslužiti samo kao polazište za potragu za patofiziološkim mehanizmom koji je u pozadini hematoloških znakova ili simptoma. Baš kao normalno kožni osip može biti ili manifestacija lokalnih poremećaja, ili posljedica dubokog poremećaja homeostaze, hematološki sindromi ili bolesti mogu imati i sasvim bezopasne i po život vrlo opasne uzroke koje kliničar mora otvoriti i proučiti.
Tablice u ovom odjeljku predstavljaju glavne elemente anamneze i nalaze fizikalnog pregleda za krvne poremećaje. Prva dva stupca navode anamnezu i podatke fizikalnog pregleda; u trećem stupcu - moguće varijante patofizioloških objašnjenja. Postoje i poveznice između razne bolesti i ključne etiološke točke.
Kada se završi anamneza i fizikalni pregled, procijene periferna krv, koštana srž i drugi važni laboratorijski podaci, postaje moguće stvoriti radnu dijagnostičku hipotezu koja kombinira mnoge složene varijable. Potreban je slobodan, kreativan, au isto vrijeme sasvim konkretan pristup formulaciji dijagnoze.
Uzimanje anamneze, fizički pregled i na kraju laboratorijska dijagnostika pružiti liječniku sve više informacija. Ponekad se morate vratiti u bolesnikov krevet ili u laboratorij kako biste još jednom provjerili početne podatke. Mogu se pojaviti dodatna, detaljnija ili neizravno popratna pitanja. Usklađivanje sve veće količine podataka može zahtijevati izvođenje komponenti fizikalnog pregleda koje su bile propuštene pri inicijalnom pregledu, kao i druge manipulacije zbog pojave novih informacija. Dakle, da bi se u potpunosti složili svi podaci, obično je potrebno više puta pregledati pacijenta. To ima svoje prednosti, s druge strane, beskrajno preispitivanje i ponovno provjeravanje “utvrđenih činjenica” može narušiti ugled liječnika. Štoviše, tijekom početnih pitanja liječnika, pacijent se nehotice "podešava" određenim odgovorima, a ponovljeno prikupljanje anamneze često ne daje nikakve rezultate.
Kada je dijagnoza praktično postavljena, razumljiva je tendencija liječnika ne uključiti ili aktivno isključiti preostale dijagnostičke mogućnosti ako se neki naknadno dobiveni podaci ne slažu s radnom hipotezom ili ako terapija temeljena na radnoj hipotezi ne dovodi do željenih rezultata. . Takav prilično čest fenomen "ranog zatvaranja" opasan je kao mogući uzrok medicinskih pogrešaka. Budući da je uvjeren u nedovoljno potkrijepljenu hipotezu, liječnik može iz razmatranja isključiti sljedeće mogućnosti:

1. Istodobni razvoj nekoliko patofizioloških procesa (na primjer, hemolitička anemija, praćena padom hematokrita s potrebom za stalnim transfuzijama krvi, može biti popraćena gubitkom krvi iz gastrointestinalnog trakta).
2. Rijetka manifestacija uobičajene bolesti (na primjer, ako pacijent s kognitivnim oštećenjem nije anemičan, treba razmotriti nedostatak vitamina B12).
3. Uobičajena manifestacija rijetke bolesti (na primjer, uzrok koji se nalazi u petehijama i bol u zglobovima, obično postoji takva kolagenoza kao sistemski eritematozni lupus, ali u isto vrijeme može biti).

To su liječnici koji pacijenta vide kroz okular mikroskopa. Ova definicija bi se mogla smatrati ekscentričnom da nije tako blizu istini. Prema njegovim riječima, svaki bi kliničar lako mogao postati članom "hematološkog kluba", no u stvarnosti to nije tako. Naravno, bris periferne krvi ne može potpuno zasjeniti pacijenta. Ali onaj tko je pažljivo ispitao ovaj razmaz može spojiti fragmentarne podatke, fokusirati nejasno formulirane ideje, podići intuitivna nagađanja na razinu znanstvenog znanja. Budući da dijagnoza zahtijeva pridržavanje pravila za dobivanje i analizu kliničkih i laboratorijskih podataka, pri ocjeni razmaza periferne krvi potrebno je pažljivo usporediti morfološke značajke pacijentove krvi s podacima anamneze i fizičkog pregleda. Drugim riječima, povratak uz bolesnikov krevet ili u laboratorij omogućuje dobivanje, pojašnjenje i dogovor o novim informacijama. Taj proces potiču rezultati mikroskopske pretrage krvnog razmaza (veličina, oblik, patološke inkluzije eritrocita, leukocita ili trombocita). Na primjer, otkrivanje mikrosferocita može ukazivati ​​na to da je temelj bolesti žučnog mjehura zabilježene u povijesti bolesti pacijenta nasljedna sferocitoza. Vrlo je vjerojatno da će detaljnije proučavanje anamneze pomoći u otkrivanju sličnih slučajeva kod rođaka, a pažljiviji pregled područja gležnja pacijenta potvrdit će da postoje tragovi ulcerativnih lezija karakterističnih za nasljednu sferocitozu. Nasuprot tome, povijest gastrektomije i male neurološki poremećaji može odvesti liječnika do mikroskopa u potrazi za makroovalocitima i hipersegmentiranim neutrofilima, karakterističnim za nedostatak vitamina B12 - mogući uzrok bolest bolesnika čak i u odsutnosti anemije.

Svi kliničari, pri pregledu razmaza periferne krvi, trebaju:

1. Razvijte pristup.
2. Znati kako se priprema krvni razmaz.
3. Započnite s malim povećanjem tražeći tipične znakove i najčešće defekte krvnih stanica (npr. agregacija eritrocita česta je kod alergije na hladnoću; povećanje broja atipičnih limfocita znak je kronične limfocitne leukemije).
4. Provjerite sve tri hematopoetske klice (eritrocite, leukocite, trombocite) istovremeno. Budite disciplinirani, ne rasipajte pažnju.
5. Budite pažljivi.
6. Obratite pozornost na opću konfiguraciju, boju, konzistenciju/unutarnju strukturu, oblik, veličinu.

Liječnici specijalisti pri pregledu aspirata koštane srži trebaju:

1. Razvijte pristup.
2. Znati kako se priprema razmaz koštane srži.
3. Znati kako se razmaz boji (metilensko plavo boji kisele strukture u plavo; eozin boji bazične strukture u crveno).
4. Pronađite vidno polje gdje su artefakti minimalni ili ih nema.
5. Počnite s malim povećanjem (velika slika, tumorske stanice, celularnost, masnoća, heterogenost, granulom, fibroza, limfom, infiltrati, megakariociti, omjer mijeloidnih i eritroidnih stanica).
6. Pogledajte dovoljno polja.
7. Provjerite sve tri hematopoetske loze (eritroidnu, mijeloičnu, megakariocitnu) u isto vrijeme. Budite disciplinirani, ne rasipajte pažnju.
8. Budite pažljivi.
9. Ne pokušavajte identificirati svaku ćeliju.
10. Pregledajte dovoljan broj polja na nekoliko različitih okna.
11. Potražite dismijelopoezu, prisutnost megaloblasta, limfocita i plazma stanica te abnormalne stanice (npr. Gaucherove stanice).

Detaljnije razmatranje smjerova istraživanja i analize specijalnih hematoloških pretraga je izvan okvira ovog poglavlja. Nadamo se da će ovdje predstavljene odredbe poslužiti kao model za provođenje i tumačenje rezultata studije.
Usporedba u tablici pojedinih znakova i simptoma s hematološkim bolestima data je prema redoslijedu uzimanja anamneze i obavljanja fizikalnog pregleda. To bi trebalo pomoći praktičaru da ispravno opiše, analizira, integrira i reintegrira specifične znakove i simptome hematoloških bolesti.

Sadržaj hemoglobina, brzina sedimentacije eritrocita (ESR), broj eritrocita i leukocita u 1 μl krvi, leukocitarna formula (postotak razne skupine leukociti), kao i indikator boje (koeficijent koji pokazuje stupanj zasićenosti eritrocita hemoglobinom) čine podatke općeg kliničkog testa krvi.
Krv za analizu uzima se ujutro (ne nužno prije doručka), ali u polikliničkim uvjetima krv treba uzeti nakon 10-15 minuta odmora.
Za testiranje se uzima krv iz prstenjak lijeva ruka nakon pažljivog tretmana alkoholom. Na bočnoj površini mesnatog dijela prve falange napravi se ubod sterilnom iglom za skarifikaciju, a ravnina igle treba biti okomita na uzorak kože prsta - u tom slučaju rana zjapi i krv se ispušta nekoliko minuta. Dugo vrijeme.

Određivanje koncentracije hemoglobina

Od metoda određivanja hemoglobina najviše se koriste metode koje se temelje na kolorimetriji, odnosno određivanju intenziteta boje.
Najjednostavniji od njih je određivanje hemoglobina pomoću vizualne kolorimetrije u hemometru Saly, koji je drveni stalak sa središnjom graduiranom epruvetom, na čijim se stranama nalaze zapečaćene staklene epruvete sa standardom boje (hematin hidroklorid u glicerinu).
0,1% otopina klorovodične kiseline prethodno se ulije u središnju epruvetu do oznake koja odgovara 2 ili 3 g%, a zatim se pažljivo (točno!) doda 0,02 ml krvi uzete iz prsta posebnom pipetom pričvršćenom na hemometar. . Površinski sloj kiseline ispere se pipetom i nakon miješanja krvi i kiseline staklenim štapićem ostavi 5 minuta da nastane hematin hidroklorid. Zatim, dodavanjem destilirane vode i stalnim miješanjem štapićem, boja tekućine u središnjoj cijevi potpuno odgovara standardima. Koncentracija hemoglobina odgovara oznaci razine otopine na donjem meniskusu. Koncentracija hemoglobina može se izraziti ili u g% hemoglobina ili u konvencionalnim jedinicama. Za 100 jedinica uzima se 16,67 g hemoglobina.
Koncentracija hemoglobina u krvi kod žena je od 11,7 do 15,8 g ° / o ili od 117 do 158 g / l, kod muškaraca - od 13,3 do 18 g% ili od 133 do 180 g / l.

Uzimanje krvi za brojanje formiranih elemenata

Za brojanje oblikovanih elemenata krv se razrjeđuje u mješalicama (melangerima) ili epruvetama, što se u novije vrijeme sve više koristi.
Za brojanje crvenih krvnih stanica krv se razrijedi 200 puta s 3% otopinom natrijevog klorida; ako za uzimanje krvi koristimo pipetu iz hemometra, čiji je volumen 0,02 ml, tada moramo uzeti 4 ml otopine natrijevog klorida.
Za brojanje leukocita krv se razrijedi 20 puta, stoga se uzima 0,02 ml krvi i 0,38 ml 3% obojene otopine metilenskog plavog octena kiselina, koji je neophodan za uništavanje crvenih krvnih stanica.
Uzorkovanje krvi mora se provoditi s velikom točnošću, jer kod tako malih volumena ulazak mjehurića zraka ili ostataka krvi na vani pipetiranje dovodi do povećanja pogreške detekcije.
Prije punjenja komore potrebno je protrljati polirano staklo u komori tako da se pojave preljevi.
Prije punjenja komore, razrijeđena krv se dobro promiješa, jer se stanice talože na stijenkama epruvete ili ampule miješalice, nakon čega se kap krvi stavi ispod brušenog stakla komore i ostavi 1 min da se taloži. Stanice.
Brojanje oblikovanih elemenata provodi se pri malom povećanju mikroskopa (objektiv 8X, okular 15X ili 10X) u zamračenom vidnom polju.

Eritrociti se broje u 5 velikih kvadrata (16x5 = 80 malih kvadrata) koji se nalaze u različitim područjima kamere, možete uzeti kvadrate koji se nalaze dijagonalno.
Broje se eritrociti koji leže unutar kvadrata i oni koji se nalaze na njegovoj gornjoj i lijevoj strani; eritrociti koji leže na donjem i desne strane, ne računaju se jer već pripadaju drugim kvadratima.
Izbrojavši broj eritrocita (A) u 5 velikih kvadrata, pronađu aritmetičku sredinu broja eritrocita u jednom malom kvadratu A / 80, tj. u 1/4000 μl. Stoga, da bismo pronašli broj crvenih krvnih stanica u 1 µl, moramo broj dobiven dijeljenjem pomnožiti s 4000 i s 200 (razrjeđenje).

Dakle, dobivamo sljedeću formulu:

X=A*4000*200/80,

gdje je X broj eritrocita u 1 µl, a A je broj eritrocita u 5 velikih kvadrata.
Ako bismo prebrojali crvena krvna zrnca u 5 velikih kvadrata i razrijedili krv 200 puta, tada bi ukupni faktor za broj A bio 10 000.
Normalni sadržaj eritrocita u krvi žena je 4-5 * 10 6, muškaraca - 4,5-5,5 * 10 6.
Leukociti se broje u 100 velikih kvadrata, ne dijele se na male, što odgovara 1600 malih. Dakle, broj leukocita koji se nađe u 100 kvadrata podijeli se s 1600, pomnoži s 4000 i 20 (razrjeđenje). U ovom slučaju, da bi se dobio rezultat, dovoljno je pomnožiti broj prebrojanih leukocita za 50. Normalni sadržaj leukocita u krvi je 5 * 10 3 - 8 * 10 3 u 1 μl.

Indikator boje krvi. Indeks boje krvi je broj koji pokazuje prosječnu zasićenost hemoglobina pojedinog eritrocita određene krvi u usporedbi sa zasićenošću pojedinog eritrocita normalne krvi.
Za normalan sadržaj hemoglobina uzeti 100 jedinica, i normalan iznos eritrocita je jednak 5.000.000.
Vrijednost indeksa boje zdravih ljudi kreće se od 0,9 do 1,1.
Pregled razmaza periferne krvi. U razmazima krvi proučava se morfologija eritrocita i razmatra leukocitarna formula, odnosno postotni odnos između različite vrste leukocita.
Da bi bili uspješni, priprema, fiksacija i bojenje krvnih razmaza moraju se obavljati s velikom pažnjom.
Za pripremu razmaza, površina čiste, nemasne čaše na udaljenosti od 0,5 cm od ruba predmetnog stakalca dodirne se kap krvi na mjestu uboda na prstu, a zatim se stavi polirano pokrovno stakalce. pod kutom od 45° u odnosu na predmetno stakalce i prvo se prinese kapi krvi tako da se raširi po stražnjem rubu pokrovnog stakalca i napravi razmaz laganim pokretom, bez oštrog pritiska. Razmaz treba završiti na predmetnom staklu s "metlicom". Namaz se suši na zraku, kada se osuši dobar, tanak namaz ima žutu boju.
Jednostavnom, zaoštrenom olovkom u sredini razmaza upisuje se ime pacijenta i datum studije, nakon čega se razmazi fiksiraju u metilnom alkoholu najmanje 5 minuta i boje prema metodi Romanovsky-Giemsa.

Boja se sastoji od mješavine kiselog (eozin) i bazičnog (Azur II) bojila. Ova metoda bojenja omogućuje diferenciranje stanica. Prvi korak u radu s brisom je procjena morfologije crvenih krvnih stanica. Da biste to učinili, odaberite tanko mjesto gdje ćelije leže odvojeno, a ne u obliku stupaca novčića. Normalni eritrociti su stanice bez jezgre, ružičaste boje, zaobljene, približno istog promjera - 7,5 mikrona, eritrociti imaju oblik bikonkavnog diska, stoga u razmazu imaju prosvjetljenje u sredini i intenzivnije obojenu periferiju.

(modul direct4)

Priprema guste kapljice

Za testiranje krvi na Plasmodium malariju, napravi se gusta kap. Krv se uzima na uobičajeni način iz pulpe prsta. Kap krvi koja izlazi iz mjesta ubrizgavanja dotakne se površinom predmetnog stakla. 2-3 kapi nanesene odvojeno razmažu se kutom drugog stakla. Suhi razmaz se prelije (bez fiksacije) bojom Romanovskog 30-40 minuta, zatim se obojena kap pažljivo ispere vodom i preparat suši u uspravnom položaju.

Podaci analize uzorka

Povećan broj eritrocita i hemoglobina u krvi može biti kod bolesti crvenih krvnih zrnaca - eritremije, tada broj eritrocita doseže 9-106 ili više.
Povećani sadržaj eritrocita u krvi može se pojaviti sekundarno, odnosno kada nema bolesti crvenog plašta hematopoeze, a broj eritrocita se povećava kao posljedica bolesti drugih organa i sustava (kod dekompenzirane difuzne pneumoskleroze, emfizem, neke vrste urođene mane srce, skleroza krvnih žila sustava plućna arterija, defekti desnog srca, cirkulatorna insuficijencija III stupnja itd.). Taj se simptom naziva eritrocitoza.
U hiperkromnoj (megaloblastičnoj) anemiji pojavljuju se morfološki promijenjeni eritrociti. Istodobno se u krvi nalaze veliki eritrociti s visokim sadržajem hemoglobina (makrociti), embrionalni eritrociti (megaloblasti), koji se obično ne nalaze u perifernoj krvi. Kod hipokromne anemije mijenja se i morfologija eritrocita: pojavljuju se mali eritrociti (mikrociti), promijenjenog oblika (poikilociti) i eritrociti s niskim sadržajem hemoglobina (hipokromni eritrociti).

Broj leukocita

Pri izračunavanju formule leukocita potrebno je odrediti strukturne značajke citoplazme i stanične jezgre. Pripadnost stanice određenoj skupini utvrđuje se na temelju ukupnosti svih znakova citoplazme i jezgre.
Pri izračunavanju formule potrebno je pridržavati se iste metode pomicanja stakla pod mikroskopom. Najčešće se koristi metoda mikroskopije na 4 mjesta razmaza. Poznato je da su leukociti neravnomjerno raspoređeni u razmazu: na rubovima je manje limfocita nego u sredini, a monocita je više na kraju razmaza nego na početku. Stoga je pri izračunavanju formule leukocita najbolje kretati se isprekidanom linijom, brojeći sve stanice koje se susreću.
Brojanje od 200 stanica praktični je minimum za rutinske kliničke studije.
Leukociti periferne krvi, ovisno o prisutnosti ili odsutnosti zrnatosti u citoplazmi, dijele se na granulocite (neutrofilne, eozinofilne, bazofilne) i agranulocite (monocite i limfocite).
Neutrofili. Veličina ćelije je 10-12 mikrona. Citoplazma stanica je blijedoružičaste boje s finom, obilnom, ljubičastom granularnošću. Normalno se u krvi nalaze ubodni (2-4%) i segmentirani (60-65%) neutrofili.
Eozinofili. Stanice su iste veličine kao neutrofili, ponekad malo veće, citoplazma je ispunjena velikim žućkastocrvenim granulama, jezgra obično ima dva segmenta iste veličine. Eozinofili su normalni 2-4%.
Bazofili. Po veličini je najmanji granulocit. Jezgra je nepravilna, višerežnjeva, zauzima gotovo cijelu stanicu, blijedoružičasta citoplazma sadrži velike tamnoljubičaste granule. Granule bazofila otapaju se u vodi, a ponekad, kao rezultat ispiranja prilikom bojenja pripravka, umjesto granula ostaju bezbojne stanice. Normalno, bazofili su 0,1%.
Limfociti. Veličina ćelija je od 7 do 10 µm. Jezgra je zbijena, zaobljena ili bobasta. Citoplazma stanica je blijedo plava sa zonom prosvjetljenja oko jezgre (perinuklearna), ponekad u citoplazmi postoje odvojena azurofilna zrnca crveno-ljubičaste boje. Periferna krv normalno sadrži 20-35% limfocita.
Monociti. Veličina ćelija je od 12 do 20 µm. Jezgra je često potkovičasta, ponekad nepravilnog oblika. Citoplazma je opsežnija od one u limfocita, pepeljastoplave boje s finom, nježnom, crvenkastom granularnošću.
Monociti su normalni 6-8%.
Povećan sadržaj leukocita u krvi naziva se leukocitoza, a snižen sadržaj leukopenija.

Bojanje i brojanje retikulocita

Retikulociti su mlade crvene krvne stanice s tankom plavom mrežnicom ili granularnošću u citoplazmi. Ove stanice karakteriziraju aktivnost crvene hematopoeze.
Za određivanje broja retikulocita koristi se metoda supravitalnog (doživotnog) bojanja. Na predmetnim stakalcima u apsolutnom alkoholu rade se razmazi briljantkrezil plave boje, a zatim se na uobičajen način napravi razmaz krvi na vitraju i stavi u vlažnu komoru 3-5 minuta, nakon čega se osuši i mikroskopira s imerziona leća. Normalno se nalazi 8-10 retikulocita na 1000 eritrocita, njihov broj se obično izražava u postotku (0,8-1%) ili u ppm (8-10% o) u odnosu na eritrocite.
Retikulociti su stanice koje karakteriziraju povećanu proizvodnju crvenih krvnih stanica u koštanoj srži.
Javljaju se u velikom postotku u perifernoj krvi kod hipokromne anemije ("maligne anemije"), kod hemolitičke anemije i drugih bolesti. Tijekom pogoršanja hiperkromne anemije opaža se smanjeni sadržaj retikulocita i njihov potpuni nestanak u perifernoj krvi.

Kako bi se spriječilo agregiranje (lijepljenje) trombocita, ubod kože se vrši kroz kap 14% otopine magnezijevog sulfata nanesenu na prst. Krv se pomiješa s magnezijem i na stakalcima se pripreme tanki razmazi koji se zatim fiksiraju i boje po Romanovskom 2 sata.
Određuje se broj trombocita na 1000 eritrocita, a znajući broj eritrocita u 1 μl, broji se broj trombocita u 1 μl krvi. Normalni trombociti sadrže od 250 000 do 400 000.
Povećanje sadržaja trombocita u krvi nalazi se s eritremijom, s bolestima slezene, s nekim oblicima malignih bolesti (na primjer, gušterače). Nizak broj trombocita javlja se kod anemije.

Definicija ESR

Brzina sedimentacije eritrocita određuje se u krvi pomiješanoj u omjeru 4:1 s natrijevim citratom.
Reakcija se stavlja u Pančenkovljev aparat. Pančenkovljeva kapilara se ispere natrijevim citratom, zatim se citrat povuče do oznake 50, gdje stoji slovo R (reagens) i upuhne u Vidalevsky epruvetu. Istom kapilarom dva puta se uzima krv do oznake K (krv) i miješa s citratom. Ista se kapilara napuni krvlju pomiješanom s citratom do podjele 0 i postavi okomito u tronožac na jedan sat. Sat kasnije bilježi se u milimetrima vrijednost formiranog stupca plazme iznad istaloženih eritrocita, što je mjera brzine sedimentacije eritrocita.
NA ESR norma kod muškaraca je 10 mm/h, kod žena 14 mm/h.
Sedimentacija eritrocita je povećana kod upalnih, akutnih i kronična bolest, s malignim tumorima i drugim bolestima.

Test kompatibilnosti Rh faktora

U epruvetu bez citrata uzme se 2-3 ml krvi primatelja, nakon zgrušavanja krvi ugrušak se zaokruži staklenim štapićem i krv centrifugira. Dvije kapi seruma iz ove epruvete nanesu se u Petrijevu zdjelicu, doda se pola kapi krvi darivatelja, promiješa i čašica se stavi u vodenu kupelj (42-45 °). Nakon 10 minuta čašica se izvadi i pogleda na svjetlu uz lagano ljuljanje. Pojava aglutinacije će ukazati na neprihvatljivost ove transfuzije krvi.